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农药残留——得杀草检测方法



录入时间:2010-4-15 13:45:29 来源:食品安全快速检测网

1.分析目标化合物

    得杀草、DMP 〔二甲基 3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-4-基)戊二酸酯〕、5-OH-DP 〔2[1-(3-氯丙基-2-(E)-烯-1-基)肟基丙基] -3,5-二羟基-5-(四氢化吡喃-4-基)环己基-2-烯-1-酮〕、OH-DMP 〔二甲基 3-羟基-3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-4-基)戊二酸酯〕

2.仪器设备

    气相色谱--质谱仪(GC/MS)。
    回流冷却器
    电热板(带有搅拌器) 

3.试剂

    甲醇
异丙醇
原甲酸三甲酯
过氧二硫酸钾
硫酸
过氧化氢:30%,特级
    氢氧化钠:特级
无水硫酸钠
    活性炭:化学分析用活性炭
    DMP标准品:含DMP 96%以上。
    OH-DMP标准品:含OH-DMP 96%以上。
   正己烷
乙酸乙酯
4.试验溶液的制备

    1)提取方法
    豆类和种子类:称取10.0g样品,加入20mL水,放置2小时。
    蔬菜:称取20.0g样品。
    加入150mL水:甲醇(1:4)混合溶液,均质后,抽滤。滤纸上的残留物中加入150mL水:甲醇(1:4)混合溶液均质,按上述同样抽滤。合并所得溶液,40℃以下浓缩至约30 mL。加入70 mL水后,加入300mL异丙醇。其150mL中加入5g氢氧化钠,缓缓摇动混合后,抽滤。用20mL异丙醇:水(4:1)混合溶液洗涤滤纸上的残留物,合并洗液到滤液中。
    2)氧化
    滤液中加入1g氢氧化钠,装上回流冷却管,在带搅拌器的电热板上搅拌、加热回流。沸腾后,从回流冷却管上端加入3mL过氧化氢,每隔10分钟再加3mL过氧化氢,重复操作3次后,再加热回流30分钟。
    3)活性炭吸附
    反应液冷却后,加入25g氯化钠,搅拌10分钟。加入20mL饱和氯化钠溶液,分取水层。异丙醇层中加入50mL饱和氯化钠溶液,激烈振荡5分钟后,静置,分取水层。合并水层,加入5mL盐酸,50~60℃下减压浓缩,除去异丙醇。
加水将析出的氯化钠溶解后,加入2.5g活性炭,激烈振荡10分钟后,抽滤。用200mL水洗涤滤纸上的活性炭后,抽滤5分钟。再用100 mL正己烷洗涤滤纸上的活性炭,抽滤5分钟。
    4)甲酯化
    滤纸和滤纸上的活性炭切除5mm角后,加入100mL甲醇,20mL硫酸,25mL原甲酸三甲酯、2 g过氧二硫酸钾,装上回流冷却管,在带搅拌器的电热板上搅拌、加热回流。沸腾1小时后,迅速抽滤。再用50mL甲醇洗涤滤纸上的残留物。接着,每次用50mL甲酸:甲醇(1:9)混合溶液,洗涤滤纸上的残留物2次。合并这些滤液和洗液,加入300mL水,每次用150mL二氯甲烷,振荡提取2次。提取液中加入50mL饱和碳酸氢钠溶液振荡,弃去水层。提取液中加无水硫酸钠脱水,滤去无水硫酸钠后,滤液在40℃以下浓缩,除去溶剂。残留物中加入1mL丙酮溶解,加入19mL正己烷。
    5)净化方法
    ① 合成硅酸镁柱色谱法
    在色谱管(内径15mm)中注入10g悬浮在正己烷中的柱色谱用合成硅酸镁,其上端再加入约5g无水硫酸钠。柱中注入4)所得的溶液,弃去流出液。接着,注入40mL丙酮:正己烷(1:19)混合溶液,弃去流出液。再注入100 mL丙酮:正己烷(1:4)混合溶液,流出液在40℃以下浓缩,除去溶剂。残留物中加入1mL乙酸乙酯溶解,加入19mL正己烷。
    ② 硅胶柱色谱法
    硅胶小柱(1000 mg)中注入5 mL正己烷,弃去流出液。柱中注入①所得的溶液,弃去流出液。接着,注入10mL乙酸乙酯:正己烷(3:17)混合溶液,弃去流出液。再注入25mL乙酸乙酯:正己烷(3:7)混合溶液,流出液在40℃以下浓缩,除去溶剂。残留物中加入1mL乙醚溶解,加入19mL正己烷。
    ③ 酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法
    酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱(1000 mg)中注入5 mL正己烷,弃去流出液。柱中注入②所得的溶液,弃去流出液。再注入10mL乙酸乙酯:正己烷(3:7)混合溶液,流出液在40℃以下浓缩,除去溶剂。残留物中加入丙酮溶解,豆类和种子类样品准确至3 mL,蔬菜样品准确至6 mL作为试验溶液。

5.标准曲线的制作

    将DMP 和OH-DMP 标准品分别配制成丙酮溶液,按照1:1的比例混合后,配制成0.1~2 mg/L丙酮溶液数点,分别注入2 μL于GC/MS中,峰高法或峰面积法制成标准曲线。

6.定量

    注入2μL试验溶液于GC/MS中,由5的标准曲线求得DMP 和OH-DMP 的含量,再按下式,求得包括5-OH-DP及其相关化合物的得杀草含量。
    得杀草(包括5-OH-DP及其相关化合物)的含量=DMP的含量×1.40+OH-DMP 的含量×1.31

7.测定条件

    GC/MS
    柱:35%苯基-甲基硅酮,内径0.25mm,长30m,膜厚0.25μm。
    柱温:100℃(2 分钟)-3℃/分钟-200℃-30℃/分钟-280℃
    进样器温度:250℃
   检测器温度:280℃
    载气:氦气
    离子化电压:70 eV
    主离子:DMP m/z 213、182、168; OH-DMP m/z 175、155、143
    保留时间标准:DMP 29分钟; OH-DMP 32分钟 

8.定量限

    0.05 mg/kg

9.注意事项
    1)分析値
    将得杀草和5-OH-DP分别转化为DMP、OH-DMP后,分别对DMP、OH-DMP进行定量,每个的含量乘以系数换算为得杀草的含量,此为分析值。
    2)试验方法概述
    本方法是将得杀草、5-OH-DP及其相关的转化生成物,经氧化和甲酯化后,以DMP及OH-DMP为分析对象的检测方法。用水:甲醇混合溶液将得杀草、5-OH-DP及其转化生成物同时提取,氢氧化钙凝固处理后,经氧化反应它们转变为3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-4-基)戊二酸(GP)和3-羟基-3-(3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-4-基)戊二酸(OH-GP)。接着经甲酯化,GP变成DMP,OH-GP变成OH-DMP,液液分配,用合成硅酸镁小柱、硅胶小柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱净化,GC/MS同时测定DMP和OH-DMP。
    3)注意点
    ① 氧化反应
    按照环境省告示的试验方法,加入1g氢氧化钾后,用30%过氧化氢作氧化剂,加热回流的方法进行氧化。
    小林ら报告了加入1g氢氧化钾、每隔10分钟加入3 mL 30%过氧化氢,共加4 次时,氧化效率最高,再继续加热回流30分钟使过量的过氧化氢分解。但是,氧化反应后溶液的pH在11~13反应能顺利进行,pH低氧化反应不进行的可能性大。取少量氧化反应后的溶液,用pH试纸确认pH值。pH偏低时,加氢氧化钾和30%过氧化氢再次进行氧化反应。
    ② 盐析后异丙醇的去除
    残存的异丙醇,会使活性炭的吸附率降低,必须完全去除。根据减压浓缩器冷却管上附着水滴、烧瓶内析出氯化钠和没有异丙醇气味判断异丙醇完全去除。
    ③ 活性炭的吸附
    按照环境省告示的试验方法,在氧化反应后的溶液盐析后的水层中加入活性炭振荡,使GP及OH-GP被活性炭吸附,抽滤和洗净。
    小林ら报告了GP 及OH-GP的水溶性高,转溶到一般的有机溶剂中较困難,但是,氧化反应后的溶液盐析和浓缩操作能完全去除有机溶剂,加入活性炭,GP及OH-GP能被吸附。
此外,残存的水分会降低甲酯化反应率。过滤后的活性炭需完全干燥。
    ④ 甲酯化
按照环境省告示的试验方法,活性炭中加入100mL甲醇后,加入2g过氧二硫酸钾,25mL原甲酸三甲酯和20mL浓硫酸,加热回流1小时进行甲酯化。
    小林ら报告了吸附在活性炭中的GP及OH-GP,GP能定量地转为DMP,因OH-GP的转变率较低,加入过氧二硫酸钾和原甲酸三甲酯使GP及OH-GP都能定量地转为DMP及OH-DMP。
    甲酯化后,为及时除去活性炭反应溶液在沸腾时应迅速抽滤,冷却后DMP及OH-DMP的回收率降低,应在温度高时迅速进行过滤。
    ⑤ 试验溶液的制备过程中,中断操作时,吸附在活性炭中的干燥状态可放置一晚,甲醇浸渍的状态放置2天。或者用饱和碳酸氢钠洗净后放置。
 
 
 

 

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