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苯并噻二唑检测方法



录入时间:2010-3-15 14:38:26 来源:青岛海博

1.  分析目标化合物

苯并噻二唑、苯并酸(苯并〔1,2,3〕噻二唑-7-羧酸)

2.仪器设备

带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪及液相色谱—质谱仪。

3.试剂

除下列试剂外,使用附录2所列试剂。
磷酸缓冲溶液(pH8): 第1液:称取71.64g磷酸氢二钠十二水和物,加水溶解至1,000mL 。第2液:称取31.21g磷酸二氢钠二水和物,加水溶解至1,000mL。将473.5mL第1液与26.5mL第2液混和,加水至1,000mL。

4.标准

苯并噻二唑:含苯并噻二唑99%以上,熔点为133℃。
苯并〔1,2,3〕噻二唑-7-羧酸(以下称”苯并酸”): 含苯并酸99%以上,熔点为261℃~262℃。

5.试验溶液的制备

a 苯并噻二唑试验溶液
① 提取方法
(I) 将样品粉碎后,过420μm 标准网筛,称取其10.0g,加入20mL磷酸缓冲溶液(pH8),放置2小时。
加入100mL丙酮,搅拌3分钟后,用涂布1cm 厚硅藻土的滤纸,抽滤至磨口减压浓缩器中。取出滤纸上的残留物,加入50mL丙酮和20mL磷酸缓冲溶液(pH8),搅拌3分钟后,按上述同样操作,滤液合并于减压浓缩器中,40℃以下浓缩至约50mL。
加入50mL 10%氯化钠溶液,滴加约1mL 0.2mol/L 氢氧化钠溶液,调整pH7.5~8.5 ,将溶液转移至300mL分液漏斗中。用100mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶,合并洗涤液于分液漏斗中。用振荡器激烈振荡5 分钟后,静置,乙醚和正己烷层移入300mL三角瓶中。水层中加入50mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液,按上述同样操作,合并乙醚和正己烷层于上述三角瓶中。
(II) 加入适量的无水硫酸钠,不时振摇、混合,放置15分钟后,滤入磨口减压浓缩器中。再用20mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液洗涤三角瓶,以此洗涤液洗涤滤纸上的残留物,重复操作2次。合并两次洗涤液于减压浓缩器中,40℃以下除去乙醚和正己烷。
残留物中加入30mL正己烷,转移至100mL分液漏斗中。加入30mL正己烷饱和的乙腈,用振荡器激烈振荡5分钟后,静置,转移乙腈层于磨口减压浓缩器中。正己烷层中加入30mL正己烷饱和的乙腈,按上述同样操作,重复2次,合并乙腈层于减压浓缩器中,40℃以下除去乙腈。残留物中加入5mL乙醚:正己烷(3:17)混合溶液溶解。
② 净化方法
在内径15mm,长300mm 色谱管中,注入5g悬浮在正己烷中的柱色谱用合成硅酸镁,其上再加入约5g无水硫酸钠,放出正己烷至柱上端余留少量正己烷。柱中注入a 提取方法所得的溶液后,加入50ml乙醚:正己烷(3:17)混合溶液,舍弃流出液。再加入150mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液,收集流出液于磨口减压浓缩器中,40℃以下除去乙醚和正己烷。残留物中加入乙腈:0.5%乙酸溶液的混合溶液溶解,准确至5mL,此为试验溶液。
b 苯并酸试验溶液
① 提取方法
按照a 苯并噻二唑试验溶液中① 提取方法中(I)进行操作所得的水层中,加入0.5mL磷酸,使之成酸性。加入50mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液,用振荡器激烈振荡5分钟后,静置,乙醚和正己烷层移入300mL三角瓶中。水层中加入50mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液,按上述同样操作,合并乙醚和正己烷层于上述三角瓶中。加入适量的无水硫酸钠,不时振荡、混合,放置15分钟后,过滤至磨口减压浓缩器中。再用20mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液洗涤三角瓶,以此洗涤液洗涤滤纸上的残留物,重复操作2次。合并2次洗涤液于减压浓缩器中,40℃以下除去乙醚和正己烷。残留物中加入5mL乙酸乙酯:甲醇(4:1)混合溶液溶解。
② 净化方法
在内径15mm,长300mm色谱管中,注入5g悬浮在乙酸乙酯中的柱色谱用合成硅酸镁,其上再加入约5g无水硫酸钠,放出乙酸乙酯至柱上端余留少量乙酸乙酯。将① 提取方法中所得溶液注入柱中后,注入50mL乙酸乙酯:甲醇(4:1)混合溶液,舍弃流出液。再加入200mL乙酸乙酯:甲醇(7:3)混合溶液,收集流出液于磨口减压浓缩器中,40℃以下除去乙酸乙酯和甲醇。残留物中加入0.5%乙酸溶液:甲醇(3:1)混合溶液溶解,准确至2mL ,此为试验溶液。

6.操作方法

a 定性试验
按照下列操作条件进行试验。试验结果必须与同样操作条件下标准品的结果一致。
①苯并噻二唑的试验
操作条件
柱填充剂:十八烷基甲硅烷基化硅胶 (粒径5μm)
柱: 内径4.6mm、长150mm 不锈钢管。
柱温: 40℃
检测器: 波长254nm
流动相: 乙腈:0.5%乙酸溶液(2:3)的混合溶液。调整流速使苯并噻二唑14~16分钟流出。
②苯并酸的试验
操作条件
柱填充剂:十八烷基甲硅烷基化硅胶(粒径5μm)。
柱: 内径4.6mm、长150mm 不锈钢管。
柱温: 40℃    
检测器:波长235nm
流动相:0.5%乙酸溶液:甲醇(3:1)混合溶液,调整流速使苯并酸24~26分钟流出。
b 定量试验
根据与a 定性试验相同的操作条件下所得试验结果,用峰高法或峰面积法定量,求出苯并噻二唑和苯并酸的含量,按照下式,求得含苯并酸的苯并噻二唑的含量。
苯并噻二唑(包括苯并酸)含量(mg/kg)=A+B×1.17
A:酸式苯并-S-甲基的含量(mg/kg)
B:酸式苯并酸的含量(mg/kg)
c 确证试验
在与a 定性试验相同的操作条件下,用液相色谱--质谱仪测定。试验结果必须与标准品的一致。此外,必要时用峰高法或峰面积法定进行量。

7.定量限

0.01 mg/kg

8.注意事項

分别对苯并噻二唑和苯并酸定量,将苯并酸含量乘以系数换算成苯并噻二唑的含量,其和为分析值。

 

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