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病原性真菌的检测(一)



录入时间:2010-3-12 9:18:10 来源:青岛海博

一、实验目的
了解真菌接种、培养的一般程序;掌握单细胞真菌和多细胞真菌的菌丝、孢子的形态特点;掌握真菌不染色标本直接检查方法。
二、实验内容
(一)真菌的菌落观察
观察真菌菌落的形态特点及颜色有助于病原性真菌的鉴定。一般观察真菌的菌落必需将真菌培养于沙保弱氏培养基(俗称大培养),经数日致十数日的培养后才可看到典型菌落。
1. 材料
(1)临床标本(可疑真菌感染):毛发或皮屑。
(2)真菌菌种:新生隐球菌,白假丝酵母菌,絮状表皮癣菌。
(3)沙保弱氏葡萄糖斜面培养基(含青、链霉素)。
(4)其它:70%酒精 、无菌生理盐水 、平皿等。
2. 方法
(1)临床标本用70%酒精浸泡数分钟,杀死表面杂菌,以无菌生理盐水洗涤。
(2)将处理过的临床标本和实验室保存菌种分别接种于2~3只含有青、链霉素的沙保弱氏葡萄糖斜面培养基上,对临床标本直接将数根毛发或数块皮屑接种。真菌菌种则用灭菌接种环按斜面培养基接种法接种。
(3)置22~28℃培养2~3w或37℃培养箱中培养3~7d。
(4)一周观察1~2次,临床标本连续培养3w无菌落生长者可报告阴性,如长出菌落,应逐日观察菌落形态及颜色变化。
3. 结果观察
真菌的菌落从形态上可分三大类:酵母菌落、酵母样(型)菌落及丝状菌落。
(1)酵母菌落(观察新生隐球菌培养物):菌落为圆形、较白色,边缘整齐表面光滑、湿润,假菌丝不伸入到培养基内,和表皮葡萄球菌菌落相似。
(2)酵母样(型)菌落(观察白假丝酵母菌):表面和酵母菌落相似,但生成的假菌丝伸入培养基内。
(3)丝状菌落:观察各种皮肤丝状菌斜面培养物,菌落表面大都有气生菌丝,肉眼观察呈绒毛状、粉状、棉花样等,故称丝状菌落,色泽多种多样,红色毛菌呈紫红色,铁锈色毛菌呈铁锈色或棕色等,菌落底层有营养菌丝伸入培养基内。

 

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