一、培养基、抗生素、生长因子
|
抗生素 |
英文名称及缩写 |
抗性基因 |
贮藏液浓度(mg/ml) |
使用终浓度（μg/ml） |
|
链霉菌 |
大肠杆菌 |
|
MM |
2CM |
YEME |
LA或LB |
|
氨苄青霉素
氯霉素
潮霉素
卡那霉素
壮观霉素
链霉素
硫链丝菌素
红霉素
阿泊拉霉素 |
Ampicillin, Amp Chloramphenicol, Cml
Hygromycin, Hyg
Kanamycin, Km
Spectinomycin, Spc
Streptomycin, Str
Thiosestrepton, Thio
Erythomycin, Ery
Apramycin, Am |
bla
cat
hyg
aac或aph
aadA
str
tsr
ermE
aac(3)IV |
100
25(无水乙醇配)
50
25
50
50
25(DMSO配)
100
50 |
R
10
10
2?
50
10
5
100
10 |
R
－
25
50
50
25
10
－
50 |
R
－
－
－
50
－
2.5
－
50 |
50-100
25
50
50
50
25
不敏感
20
30-50 |
*– 表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制
*此表仅供参考！！！
*R表示不敏感
*Km 和Am有交叉抗性，所以同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并作好对照。
*Hyg易见光分解，应用锡箔纸包好。
*有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio
LB（Luria-Bertani）培养基
胰蛋白胨 10g，
酵母抽提物 5g，
NaCl 5g，葡萄糖 1g，
蒸馏水加至 1000ml，
pH7.3左右（灭菌后第一次用时还要调一次）
LB中加入终浓度为1.5-2%的琼脂粉(不同的琼脂加的量不同，如青岛琼脂大概需1.5%，而华美的需要2%)。
＊做蓝白斑筛选时不加葡萄糖
溶液：L-天冬酰胺 0.5g，
K2HPO4 0.5g,
MgSO4·7H2O 0.2g,
FeSO4·7H2O 0.01g,
蒸馏水至 1000ml
将每250ml溶液分装到装有2.5g琼脂的500ml三角瓶中，灭菌，使用时每瓶加入50％葡萄糖（8磅灭菌）5ml，调pH7.0。
配置MM的琼脂有lab agar、Ice agar(IA)
R5（1L）链霉菌原生质体转化时用
蔗糖 103g
K2SO4 0.25g
MgCl2·6H2O 10.12g
葡萄糖 10g
Difco酪蛋白氨基酸 0.1g
微量元素溶液 2ml
Oxoid酵母提取物 5g
TES 5.73g
加蒸馏水至 1000ml
称取5.5g Difco琼脂放入500ml三角瓶中，倒入250ml上述溶液，然后塞上塞子后8磅灭菌（114度15分种）。使用时，将培养基融化，每瓶中加入：
KH2PO4(0.5%) 2.5ml
CaCl2·2H2O(5M) 1ml
L-脯氨酸(20%) 3.75ml
NaOH(1M)调pH至7.3
对营养缺陷型菌株加入适当的营养因子（请参考《手册》）
YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌）
Oxoid酵母提取物 3g
Oxoid蛋白胨Tryptone 5g
麦芽提取物（BD公司原Difco公司218630） 3g
葡萄糖 10g
蔗糖 ＊ 340g
蒸馏水 至1000ml
高压灭菌后加入：（8磅灭菌，113－114゜C，15min，自动灭菌锅一次不能灭过多东西，否则会灭不彻底。）
MgCl2·6H2O(2.5M) 2ml/L
制备原生质体时，还要加入：
甘氨酸（20%） ＊ 25ml/L
＊ 蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。
＊ 甘氨酸被认为能干扰链霉菌细胞壁的形成，使菌丝体片段更短，利于溶菌，有利于外源DNA的导入。
TSBY （1L）（液体培养链霉菌）
Oxoid胰胨豆汤粉（TSB） 30g
蔗糖＊ 340g
Oxoid酵母抽提物 5g
蒸馏水 至1000ml
*不同菌株培养需要不同浓度的蔗糖，蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。
将黄豆饼粉加蒸馏水煮2到3小时，用纱布过滤得到滤液，将每250ml滤液分装到装有5g琼脂，5g 甘露醇的500ml三角瓶中，10磅灭菌，使用时调pH7.2-7.3。
2CMY培养基（用于井岗的接合转移）
可溶性淀粉 10g
胰蛋白胨 2g
NaCl 1g
(NH4 )2SO4 2g
K2 HPO4 1g
CaCO3 2g
无机盐溶液* 1 ml
琼脂 20g
蒸镏水 1000 ml
PH7.2
无机盐溶液(每升)
FeSO4 .7H2 O 1g
MgCl.6 H2 O 1g
ZnSO4. 7H2 O 1g
YMS培养基（阿维，井岗产孢）
酵母抽提物 4g
可溶性淀粉 4g
麦芽糖 10g
CoCl. .6 H2 O 5mg
琼脂 20g
蒸镏水 1000 ml
PH7.2
酵母抽提物 4g
麦芽糖 10g
葡萄糖 4g
MgCl 2g
CaCl 1.5g
琼脂 15g
蒸镏水 1000 ml
PH7.2
天蓝色链霉菌1258 、J1501等都是营养缺陷型菌株，培养这些菌株时一般需向培养基中补加营养因子，使用浓度如表
生长因子补充物的使用浓度表
|
化合物 |
储存液（mg/ml）1 |
终作用浓度（μg/ml） |
|
组氨酸（Histidine） |
10 |
50 |
|
其它氨基酸2 |
7.5 |
37 |
|
腺嘌呤，鸟嘌呤，
胸腺嘧啶，尿嘧啶 |
1.5 |
7.5 |
|
维生素 |
0.1 |
0.5 |
1. 储存液用无菌去离子水配置，8磅灭菌后4oC保存。
2. 对于半胱氨酸营养缺陷型菌株，补充光氨酸。
上一篇：链霉菌菌种保藏
下一篇：链霉菌实验操作3
