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酱油—菌落总数的测定—平板计数法



录入时间:2009-8-27 14:32:37 来源:食品科技网

1  范围
本方法采用平板计数法测定餐桌酱油中菌落总数的含量。
本方法适用于餐桌酱油中菌落总数的测定,以cfu/mL 报告其结果,测定值保留两位有效
数。
2  原理
样品经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、PH、需氧性质等) ,
所得1 mL 检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得的结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
3  试剂
3.1  氢氧化钠溶液,150g/L
3.2  生理盐水
3.3  乙醇溶液,750g/L
3.4  营养琼脂培养基:将10g蛋白胨、3g 牛肉膏、5g 氯化钠溶解于 1000mL 蒸馏水中,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正PH至7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。
4   仪器
4.1   温箱:36±1℃
4.2   恒温水浴:46±1℃
5   操作步骤
5.1  样品处理:用点燃的酒精棉球烧灼瓶口灭菌,用石碳酸纱布盖好,再用灭菌开瓶器启开后进行检验。
5.2  检样稀释及培养
5.2.1   以无菌操作,吸取酱油样品25 mL,加入装有225mL灭菌蒸馏水的灭菌玻璃瓶内经充分振摇做成1:10 的均匀稀释液。
5.2.2   用 lmL 灭菌吸管吸取 1:10 稀释液 lmL,沿管壁徐徐注入含有 9mL 灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成 1:100 的稀释液。
5.2.3  另取 lmL灭菌吸管,按 5.2.2操作顺序,做10 倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,
即换用1 支lmL灭菌吸管。
5.2.4   根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2 一 3 个适宜稀释度,分别在做10 倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移 lmL 稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
5.2.5   稀释液移入平皿后,应及时将凉至 46℃营养琼脂培养基(可放置于 46±1℃水浴保温)注入平皿约 l5mL,并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有lmL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
5.2.6  待琼脂凝固后,翻转平板,置36士 l℃温箱内培养 48 士 2h。
5.3   菌落计数方法
    做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板的
菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
5.4   菌落计数的报告
5.4.1 平板菌落数的选择
    选取菌落数在30 一 300 之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落;如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。
5.4.2  稀释度的选择
5.4.2.1  应选择平均菌落数在30 一 300 之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。
5.4.2.2  若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30 一 300 之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于 2 则报告其中较小的数字。
5.4.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
5.4.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30, 则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。                                                                          
5.4.2.5 若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1 乘以最低稀释倍数报告之。
5.4.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30一300之间, 其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30 或300 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
5.4.3  菌落数的报告
    菌落数在100 以内时,按其实有数报告,大于100 时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数, 也可用10的指数来表示。

 

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