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可乐耐热耐酸菌的检测方法



录入时间:2009-8-27 11:05:07 来源:食品科技网

 
介绍
浓缩果汁中有时含有导致腐败的芽孢菌,耐酸耐热菌,也叫TAB,它们的特点是:
1)  能耐热的孢子;
2)  能耐果汁中的酸;
3)  能在含有很少量的氧中生长;
这个程序描述了检验浓缩苹果清汁(比如苹果)的TAB的检验方法。
2   设备和试剂
2.1  设备
2.1.1  三角瓶:1000ml。
2.1.2  灭菌的99ml的去离子水的稀释空白。
2.1.3  磁力搅拌棒。
2.1.4  带有搅拌器的加热盘。
2.1.5  塑料注射器:10ml。
2.1.6  注射用的滤膜装置(0.45um)。
2.1.7  灭菌培养皿:90mm。
2.1.8  恒温水浴锅:74-76°C。
2.1.9  恒温培养箱:43±1℃。
2.1.10 广口灭菌吸管:25ml。
2.1.11 一次性的带有螺旋盖子的试管。
2.1.12 可以无菌过滤0.45um的过滤装置。
2.1.13 异丙基酒精。
2.2   试剂
2.2.1 酵母粉(VWR DF0127-15)
2.2.2 蛋白胨(VWR DF0118-15)
2.2.3 琼脂粉(VWR DF0145-17)
2.2.4 葡萄糖(VWR EM-DX0145-11)
2.2.5 吐温80(VWR JTX 257-7)
2.2.6 苹果酸(VWR JTP494-7)
3   操作步骤
3.1 配制K氏培养基,在一个1升的烧瓶中,加入:
3.1.1 去离子水:500-mL
3.1.2 酵母粉: 1.25-g
3.1.3 蛋白胨: 2.50-g
3.1.4 琼脂粉: 7.50-g
3.1.5 葡萄糖: 0.50-g
3.1.6 吐温80:0.50-mL
3.1.7 磁力搅拌装置
或者直接购买K氏培养基,按照厂家的说明配制。
3.2  加热使药品充分溶解。
3.3  轻轻的盖上烧瓶的塞子,将培养基在15磅下高压灭菌25分钟。
3.4  在一个小烧杯中加入1.0克的苹果酸和10 ml去离子水,搅拌使其溶解。
3.5  将苹果酸的溶液抽入10ml的一次性塑料注射器中。
3.6  在塑料注射器的末端进行无菌的滤膜过滤。
3.7  K氏培养基灭菌结束后,将苹果酸的溶液用注射器无菌的滤膜过滤到K氏培养基中,充分摇匀。
3.8    当培养基冷却到大约50°C时,将酸化后的培养基倒入到一次性培养皿中。
3.9    等待培养基凝固后,在≤5°C的条件下冷藏,可以保存60天。
3.2  采样
3.2.1 样品不必采取无菌的方式采集,但是要防止和其他样品的交叉污染。
3.2.2 采样的容器必须是灭菌的。
3.2.3 取样时,从大桶中取样出来所用的器具应先用水清洗,然后在200ppm的有效氯中浸泡后,才可以浸入大桶中取样。
3.3 热冲击
3.3.1 调节水浴锅到74-76°C。
3.3.2 用一个广口吸管吸取1ml样品于带有盖子的试管中,准备测试。
3.3.3 加入10ml灭菌水。
3.3.4 紧紧的盖上试管的盖子。
3.3.5 将此样品放到水浴锅中,用计时器计时13分钟。
数据分析
4.1  将热冲击后的样品加入到99ml的灭菌水空白中,充分混匀。
4.2  用一次性的0.45um的滤膜过滤稀释液。
4.3  移开过滤器的上部。                                                       
4.4  将镊子的尖端在酒精中浸后,点燃灭菌。
4.5  用这个灭菌的镊子将滤膜夹到K氏培养基上。
4.5  轻敲滤膜使它紧贴到K氏培养基上。
4.6  盖上培养皿的盖子,把培养皿包起来,以减少培养基的干燥。
4.7  在培养箱底部的架子上放一盘去离子水,以保证培养箱内潮湿防止培养基干裂。
4.8  放置培养皿时,将培养皿的盖子朝下。
4.9  在43°C 下培养 5天,记录滤膜上的菌落数,它们是1ml的浓缩果汁样品的TAB数目。
 
参考资料:Coca Cola公司耐热耐酸菌的检测。
 

 

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