1.     未开封时，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。

2.     已开封的，将封口以胶带封紧。

3.     已启开的包装袋不要冷藏并于一个月内使用完。

4.     制备食物样品稀释液，称取或吸取食物样品，置入适宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内

5.     加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的旦白胶水(ISO方法6887) 、缓冲旦白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水.但不可用含有枸橼酸盐、bisulfite or thiosesulfate的缓冲液. 因为它能抑止菌生长。

6.     搅拌或均质样品.样品的稀释液调PH6.6-7.2对酸性样用IN NaOH、碱性样用INHCI调PH。

7.     将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。

8.     使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。

9.     细心将上层膜缓慢盖下，避免有气光泡产生，切勿使上层膜直接落下。

10.  使用压板（平面底朝下）放置在上层膜中央处。

11.  轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。

12.  拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。

13.  测试片的透明面朝上，可堆叠至20片。培养时间和温度因方法而有不同，最通用的认可方法是：
总大肠菌群
● AOAC官方方法986.33和989.10（乳/生乳和其它乳制品）
大肠菌群：32℃±1℃培养24±2h
● AOAC官方方法991.14（食品类）
大肠菌群：35℃±1℃培养24±2h
● NMKL方法（147.1993）
大肠菌群：37℃±1℃培养24±2h
● AFNOR认可方法3M 01/2-09/89A和B（除水生贝壳类动物外的所有食品）
大肠菌群：30℃±1℃培养24±2h
耐热的（粪）大肠菌群
● AFNOR认可方法，3M 01/2-09/89C（所有食品） 44℃±1℃培养24±2h。当提高培养温度时，培养箱应有一定的湿度是需要的。

14.  可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。

15.  可以分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶上挑取单个菌落。