7.培养与增殖特性大多数腺病毒具有比较严格的宿主动物范围。一种动物的腺病毒一般不感染异种动物。而且在组织培养细胞中，也以该宿主动物来源的细胞最为敏感，上皮样细胞似乎比纤维样细胞更为敏感。故在腺病毒的分离培养中，通常应用宿主动物来源的原代、继代或传代细胞(主要是肾细胞)。但在连续传代后，常可适应其它动物来源的细胞培养物。腺病毒通过其纤突球部与敏感细胞膜上的特异性受体结合后，即开始了感染过程。结合后的病毒，或依靠细胞的吞饮作用，或直接侵入细胞。进入细胞浆内的病毒立即脱衣壳，五邻粒发生解离，进而降低了衣壳的稳定性，其它六邻粒及其相关蛋白也发生分离。裸露的病毒核心体通过核膜上的空隙进入核内，或释放出DNA进入核内，这个过程可在1～2个小时内完成。病毒DNA在核内复制之前，病毒基因组的立即早期和早期mRNA即被转录。这些前期mRNA在感染后1～2小时即开始形成，2～3小时可以在细胞浆的核糖体上出现并翻译成数种早期蛋白。胞核内的前期mRNA为高分子结构，但胞浆内却主要是以16S和23S为主的mRNA。研究表明，在E1A启动子控制下的RNA合成最早发现于病毒感染后1小时，而E1B、E2B、E3和E4的转录发生在感染后15～20小时。E1A、E3和E4转录在感染后3～4小时达到高峰，然后开始下降，而E1B和E2B在感染后6～7小时达到高峰，然后开始下降。DNA复制一开始，所有早期转录可增加3～10倍，这可能反映了DNA模板数量的增加。在感染的中期，也就是感染后8～12小时，Ⅸ和Ⅳa2启动子最为活跃。主要晚期启动子(MLP)和E2区的E2A的第二个启动子控制的转录在这一时期开始增加。MLP在18小时达到高峰。其转录的RNA约占全细胞RNA的20%～30%，并至少在10小时内保持稳定。在感染后7～8小时，DNA合成的同时，后期mRNA开始转录。这些mRNA比较稳定，它们是翻译成病毒粒子蛋白质的mRNA。构成病毒粒子的五邻粒、六邻粒和内部蛋白，都在DNA复制以后合成。六邻粒和五邻粒蛋白质的合成量比构成病毒衣壳的蛋白质的量要多得多。但合成内部蛋白的量并不比组成病毒内部蛋白的实际需要量多。多余蛋白质的机能还不清楚，但其中肯定包括T抗原和P抗原。病毒的DNA复制为半保留复制，始于两条链的任何一端C处，后者与前体末端蛋白(pTP)结合，成为pTPdCMP复合物，作为引物。pTPdCMP复合物有效的合成则需要其它二种病毒蛋白，一是病毒编码的DNA聚合酶，一是病毒编码的DNA结合蛋白，此外还有NF1蛋白，它的结合位点是TGG(N)67GCCAA。在感染后6～8小时，病毒DNA即在核内复制，18～20小时达到高峰，然后开始晚期转录，晚期mRNA也进入胞浆核糖体进行翻译，再回到核内进行包装，包装时先形成一个原衣壳，这大约在衣壳蛋白产生2小时之后完成。复制的DNA进入原衣壳内，形成成熟的病毒粒子，再释放到细胞外，释放期可长达13～17小时。根据测定，DNA的生产量常是最终进入子代病毒粒子的DNA的10倍。组成病毒粒子，似乎需要高浓度的核酸和蛋白质。但病毒DNA转录物(mRNA)译制病毒特异的早期蛋白质，是病毒DNA复制所必需的。而子代DNA的产生，又为后期转录物和后期病毒蛋白的形成创造条件。虽然腺病毒的DNA是在细胞核内复制和转录的，但是病毒蛋白是在胞浆的聚核蛋白体上生成的。后期蛋白质主要就是病毒粒子的结构蛋白。通常是在形成多肽链后就迅速运入细胞核内，以便与已在核内生成的子代DNA组装成成熟的病毒粒子。成熟的病毒粒子经常在感染细胞核内形成结晶状聚积，在细胞崩解时释出于细胞外。在腺病毒的增殖周期中，DNA复制前为早期，DNA复制后为晚期，早期表达蛋白的主要功能是调节基因表达和DNA复制；晚期蛋白主要是病毒粒子成份和病毒包装蛋白。一般也可将病毒复制周期分为早早(极)期、早期、中间期和晚期，各指感染后0～2、2～6、6～12、12～36小时。病毒感染后15～17小时，感染细胞内的病毒量增高。在感染后20小时左右，细胞外开始出现病毒，病毒量于感染后25～36小时达高峰。由于腺病毒对敏感细胞的吸附效率较低，且因病毒的释放也不完全，因此细胞培养物在接种病毒以后，经常需待7～10天，甚至2～4周以后才能出现比较明显的细胞病变。但犬和猴等腺病毒产生细胞病变较快(2～4天)。腺病毒增殖时，感染细胞的有丝分裂被阻断，糖酵解增高，酸产量增多。因此感染腺病毒的细胞培养液变酸(这与感染其它病毒的细胞培养物不同，在这些细胞培养物内，当感染细胞破坏时，PH变碱)。此时，感染细胞变圆，且集聚成不规则的葡萄串状。胞核内出现单个的大型嗜碱性包涵体。胞核增大，有时还可看到嗜酸性包涵体，包涵体内聚集有蛋白质和病毒粒子结晶。