来自人传代细胞系的细小病毒　　关于传代细胞系可能有本属病毒污染的问题，是Hallauer等在研究黄热病病毒细胞培养时首先发现的，由于它关系到细胞系能否长期稳定传代和使用的一系列问题，以致引起了有关学者的重视。尤其在病毒学试验中，经常使用传代细胞系，因此，有必要对这一问题作简要介绍。　　Hallauer等从1960年到1971年的11年间，对从欧洲某些实验室搜集来的43株人传代细胞系，进行了病毒分离试验。由于细胞系的带毒往往是潜伏状态的，细胞培养物并不经常产生细胞病变或者仅出现难以辨认的轻微退行性变化，给病毒的识别和分离带来困难。因此，除部分病毒是通过细胞病变识别的以外，大多数是以检出血凝素为先导，确定有红细胞凝集性因子存在，然后再进行病毒的分离和鉴定。由于病毒主要与细胞结合存在，为了把病毒从细胞中提取出来，Hallauer等应用碱性等渗缓冲液(02M甘氨酸缓冲液，pH90)对细胞单层进行浸泡以提取病毒：首先倒出被检细胞瓶中的维持液，以Hanks液清洗一次，然后加入上述碱性缓冲液覆盖细胞单层，室温浸泡30分钟，倒出上清液，即为含病毒的细胞浸出液。应用PBS对浸出液作倍倍稀释，然后加入08%豚鼠或人O型红细胞悬液，混匀，室温静置1～2小时判定。凝集价可高达千倍到万倍。另外，由于病毒在碱性环境中容易从细胞中释放，所以简便的办法是在换液时提高使用维持液的pH(76～78)，培养数天后，即可直接取维持液作血凝素检查，但它不如细胞浸出液的血凝效价高。通过这种方法，Harllauer等成功地检出了细胞系中污染的细小病毒，而且检出率之高，达到了惊人的程度(见表37-3)。