这一实验的目的是确定腺病毒是否能将DNA转导入293之外的某一细胞株。该实验至关重要，因为它将确定腺病毒是否可应用于这个细胞株，以及如果能应用则需要多少的病毒量（也就是需要大量扩增的程度）来完成整个研究。这个实验中，如果用的是Ad5-CMV-LacZ则检测β-半乳糖苷酶，Ad5-CMV-GFP或Ad5-CMV5-GFP则检测GFP。这些高滴度的产品都可单独向昆腾公司购买。本实验的阳性对照（β-半乳糖苷酶检测）亦可向昆腾公司购买，但由于病毒滴度太低而不适于直接进行实验，通常需要扩增以达到理想的病毒滴度（扩增步骤见5.6）。   腺病毒转导的效率各个细胞株都不太一样，其中尤以淋巴细胞株最难转导。

腺病毒感染力测定通常在多孔板中进行，MOI为1~200，当测定淋巴细胞株时MOI可至1000。对大多数细胞株来说，1~50的MOI值可将报告基因转入所有的细胞而不会出现任何的毒性。在高MOI情况下，某些病毒蛋白的高表达可对某些细胞产生毒性。无论MOI为多少，感染时都必须用最小的培养液体积并不断晃动，以使感染效果达到最佳。

1. 按5.2.1中所述方法在6孔板中用不同数量病毒感染细胞（合适的MOI范围），培养48小时。

2. 进行X-gal染色（见下述）。注意细胞与病毒培养后不必清洗细胞，在整个实验过程中让病毒留在培养液中。

 

5.4.1 X-gal染色 

1. 弃去培养液，用37℃预热的PBS冲洗一遍，然后加入足量固定液（戊二醛或多聚甲醛）以覆盖细胞，0.05%戊二醛室温孵育5~15分钟或2%多聚甲醛室温孵育60分钟。

2. 弃去固定液，室温下用PBS彻底洗3遍：第一遍将冲洗液立刻弃去，第二、第三遍则让冲洗液保留5分钟。

3. 加入最小体积的X-gal溶液。  

4. 37℃孵育1至12小时（过夜），阳性细胞将被染成蓝色。染色完成后可将培养板置于4℃保存。

溶液： 

a） 戊二醛固定液 

使用前将戊二醛用PBS稀释至终浓度为0.05%。

b） 多聚甲醛固定液 

1. 将2g多聚甲醛溶解在50mL预热至55℃的水中。

2. 加入2滴10 N NaOH，溶液将变澄清。

3. 待多聚甲醛溶解后，加入10mL 0.2M 磷酸二氢钠（2.76g/100mL）和40mL 0.2M 磷酸氢二钠（无水，3g/100mL）。  

4. 固定液在37℃条件下加入，在室温下固定。多聚甲醛固定液可在4℃最长保存一个星期。

c） X-gal溶液

用PBS制备（PH7.4）：

20 mM氰铁酸钾 ( K3Fe(CN)6 )

20 mM氰亚铁酸钾 ( K4Fe(CN)6•3H2O )

2 mM MgCl2或MgSO4

使用前加入X-gal储存液（20mg/mL溶于N,N-二甲基甲酰胺），终浓度为1mg/mL。