4.2.1 共转染的一般原则 

1） 将线性化转移载体和pAdEasyTM-1 DNA共转化BJ5183必须要用高活性的感受态细胞。试剂盒中提供的细菌为电穿孔感受态，有很高的转化效率。如果不用电穿孔法进行转化，那么必须制备化学敏感性感受态细胞，并在应用之前试验其转化活性（108已足够）。

2） DH5α不可用于转化，因其不支持重组，它只是用来扩增重组病毒DNA。

3） 本实验需要2ug线性化胶纯化的重组转移载体，共转化和对照各需1ug。 

4.2.2 共转化方法

同时进行实验组和对照组的转化实验： 

实验组共转化：1ug线性化重组转移载体（5ul）和1.0ul pAdEasyTM-1载体（100ug/ul）  

对照组转化：1ug（5ul）线性化重组转移载体   _n YG;lf 

1． 将BJ5183感受态细胞和电穿孔杯置于冰上。将细胞分为2管，每管40ul。

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2． 40ul感受态细胞中至多加入6ul DNA，且DNA必须溶于水，避免含有离子。

3． 将BJ5183转入2mm电穿孔杯，防止有气泡形成。

4． 按电穿孔供应商的使用说明转化BJ5183，Bio-Rad仪器一般使用的参数为：200 Ohms、25uF、2.5KV；BTX仪器则为：5 Ohms、2.5KV、c=3.o

5． 用1mlLB重悬转化物。

6． 转入15~50ml离心管中，37℃震荡培养60分钟。

7． 将转化物铺3~5块 LB/Kan（50ug/ml）培养板，37℃培养24小时。建议分别铺100、300和600ul，以提高至少在一块板中得到可分离菌落的机率，应该得到40~100个菌落。

8． 挑出24个最好的克隆，转入2ml LB/Kan（50ug/ml）培养液中培养10~15个小时。不要储存BJ5183培养液，因有可能产生非目的重组子。尽快抽提重组AdEasyTM质粒.

9． 用传统碱裂解法小量制备质粒，取一半进行0.7%琼脂糖凝胶电泳，验证超螺旋质粒的大小。玻璃珠或树脂制备质粒的试剂盒应避免使用，但粘粒DNA抽提试剂盒可以用。重组质粒大小约40kb，由于它是低拷贝质粒，所以小量制备时应相应调整具体操作。

4.2.3 预期结果