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微生物检验——倾倒平板法



录入时间:2009-8-13 14:12:42 来源:食品伙伴网

用倾倒平板法作为常规微生物检验并不很理想,因为1-2ml的样品量未必能正确显示真正的菌数。即只有当菌数较高(每毫升大于30)时,才能得到准确的结果。然后由于过滤困难,对于某些果汁或含果汁饮品还要采用以上方法进行微生物检验作为一般准则,当样品无法过滤时才使用倾倒平板法。
二、培养基
总菌数             橙血清琼脂
酵母和霉菌数    橙血清琼脂(适用于低PH果汁饮料)
大肠菌数          EHDV琼脂
注:所有培养基必须根据制造商的使用说明进行配制和杀菌,由于培养基对热敏感,故加热时要避免过热,另外配好的培养基要倒入100-120ml瓶或16-18ml试剂管并盖好,而每个容器里留存15%空间。
三、测定方法
1. 使用前需将装有培养基的瓶子或试管弄松,然后放在滚水或蒸汽浴里进行溶解,要小心避免培养基过热变质。
2. 溶解之后马上将它们移到47±2℃恒温水槽里,当培养基温度未降到水槽水温之前不能拿出来使用。
3. 已消毒培养皿的数量要比所测样品的数量多一个做空白对照。
4. 掀起培养皿上盖,并将样品用无菌吸管或勺子移入培养皿中。
5. 采用火焰消毒无菌操作法打开培养基瓶或试管的盖子。并往每个培养皿倒入16-18ml培养基。
6. 盖回上盖,并沿着8字行路线轻微移动培养皿使样品与培养皿完全混匀。注意勿将培养皿里的培养基贱到到培养皿壁或盖上。
7. 待培养基凝固后,将培养皿倒置,并于适当温度进行培养。
总菌数    35℃   大肠菌数   35℃  酵母和霉菌数     28℃ 
注:①为防止在过滤膜表面形成冷凝水,所有培养皿必须倒置培养箱中。
②在培养箱中放置一烧杯水,以维持适当温度。
8. 橙血清琼脂上酵母和细菌是无法用肉眼分别的,故除非可借助显微镜。除霉菌之外都当酵母菌计,大肠菌群颜色红色。
9. 菌落数的计算:
① 必须分别在培养24h和72h后计算菌群。点计所有菌落(不管类型)并记录最高数目。
② 酵母﹑霉菌:在培养48h后计点霉菌和酵母数,并在此后每隔24h再计点一次直到过第三天,记录最高数目。
A酵母菌通常为圆形白色菌落,有时它们也带颜色,在1~2天后一些酵母菌菌落中心因吸收培养剂中指示剂而成颜色。
B霉菌菌落会显示不同颜色(包括白、黄、红、蓝、黑)但以其“绒毛状”或“棉花状”外观很易辨认,通常比细菌或酵母菌菌落为大。
C细菌菌落通常比酵母菌还快吸收指示剂,而其颜色会变成蓝绿或褐色。在这种培养剂中细菌菌落一般比酵母菌小。
D大肠杆菌菌落呈绿色或墨汁色,并有的显金属光泽。在培养24h,另计算有“金属光泽”的菌落。
 

 

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