李斯特菌属简介
《伯杰氏鉴定细菌学手册》第9版中，李斯特菌属有7个种：单核细胞增生李斯特氏菌（L. monocytogenes）、英诺克李斯特氏菌（L. innocua） 、西尔李斯特氏菌（L. seeligeri） 、威尔斯李斯特氏菌（L. welshimeri） 、绵羊李斯特氏菌（L. ivanovvi） 、格氏李斯特氏菌（L. grayi） 、默氏李斯特氏菌（L. murrayi） 。
单核细胞增生李斯特氏菌是李斯特氏菌病的致病菌，可引起动物的感染，也可引起人的感染。
单核细胞增生李斯特氏菌——生物学特性
形态特征：
革兰氏阳性短杆菌，大小为0.4~0.5×0.5~2μm， 两端钝圆，常两两相串成弯曲及V形，偶尔有球状、双球状、短链状，但很少有长链状，兼性厌氧、无芽孢，一般不形成荚膜。该菌有4根周毛和1根端毛，周毛易脱落。20℃培养后可见到很多鞭毛。
培养特性：
l生长温度为2~42℃（冷藏不能阻止该菌的生长），最适生长温度为35~37℃。20~25 ℃培养有动力，37 ℃培养动力消失；在显微镜下观察该菌新鲜的室温肉汤培养物可见翻筋斗运动。
l在pH3.8~4.4仍能生长，在pH中性至弱碱性（9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好，在6.5%NaCl肉汤中也能良好生长。
l血平板上：菌落通常不大呈灰白色，刺种血平板可产生窄小的β溶血环。
FDA BAM单核细胞增生李斯特氏菌检验流程
1、增菌：检样25g+EB增菌液基础225mL，在30℃下培养4h。
2、选择性分离培养：加入抑菌剂（1）在30℃下培养20h → 接种OXA和 PALCAM，在35℃下培养24-48h。
（2）在30℃下培养44h → 接种OXA和PALCAM，在35℃培养24-48h。
3、生化鉴定：TSA-YE纯培养，在30℃下培养24-48h。
（1）典型运动、过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验。
（2）TSB-YE：甘露醇、木糖、鼠李糖、七叶苷、葡萄糖、麦芽糖、SIM动力、硝酸盐还原试验。
ISO单核细胞增生李斯特氏菌检验流程
1、测试样品（x g或x mL）+9x mL一次增菌培养基（Half Fraser肉汤），在30℃培养24±2h。
2、（1）1mL培养液加入10mL二次增菌培养基中 （Fraser肉汤）在35℃或37℃培养48±2h→划线接种Oxford琼脂和PALCAM琼脂，在30℃、35℃或37℃培养24-48h
（2）划线接种Oxford琼脂和PALCAM琼脂，在30℃、35℃或 37℃培养24-48h。
3、李斯特菌属的确证：挑取可疑菌接种TSAYE培养基、过氧化氢酶试验、革兰氏染色、
动力试验。
4、单核细胞增生李斯特菌的确证：溶血试验、碳源利用试验、CAMP（协同溶血）试验。
单核细胞增生李斯特氏菌——溶血试验
制备5~7%羊血琼脂平板。
挑取TSAYE平板上的典型菌落刺种血平板，刺种时避免接触到平板底部和使琼脂破裂，同时接种阳性（单核细胞增生李斯特氏菌）和阴性（英诺克李斯特氏菌）对照。
单增呈现狭窄、清晰、明亮的β-溶血；
西尔李氏菌出现弱的溶血现象；
绵羊李氏菌通常呈宽的、轮廓清晰的β-溶血；
英诺克李氏菌不产生溶血现象。
单核细胞增生李斯特氏菌——协同溶血试验（CAMP）
方法：在羊血琼脂平板上平行接种β-溶血金黄色葡萄球菌（S.aureus）和马红球菌(R.equi),在它们中间垂直划线接种可疑菌，与两线相近但不相交，在30℃培养24h-48h,检查平板中垂直接种点对溶血环的影响。
结果：靠近金黄色葡萄球菌接种点的单增李斯特氏菌的溶血增强，西尔李斯特氏菌的溶血也增强，绵羊李斯特氏菌在马红血球附近的溶血增强。
ISO李斯特氏菌鉴定反应
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种别 |
溶血性 |
产酸 |
CAMP试验 |
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鼠李糖 |
木糖 |
金黄色葡萄球菌 |
马红球菌 |
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L.monocytogenes
L. innocua
L. ivanovvi
L. seeligeri
L. welshimeri
L. grayi
L. murrayi |
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(+)
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v
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(+)
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v: vatiable reaction
(+): weak reaction
+: >90% of positive reaction
-: no reaction |
FDA李斯特氏菌属的区别
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种别 |
溶血性 |
毒力a |
糖发酵c |
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甘露醇 |
鼠李糖 |
木糖 |
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L.monocytogenes
L. ivanovvi
L. innocua
L. welshimeri
L. seeligeri
L. grayi
L. murrayi b |
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v |
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a: mouse test
v: variable biotypes
b: 硝酸盐还原试验阳性，其它种该反应为阴性。
c: 葡萄糖、麦芽糖、七叶苷糖发酵试验全部为阳性。 |
几种常用稀释缓冲液介绍
磷酸盐缓冲液
储备液的制备：称取34g磷酸二氢钾溶解于500ml蒸馏水中，用1NNaOH
溶液调整pH值为7.2，再用蒸馏水稀释至1000ml，121℃高压灭菌
15min，于冰箱中储存。
稀释液的制备：取1.25ml储备液，用蒸馏水稀释至1000ml，定量分
装，121℃高压灭菌15min备用。
0.85%生理盐水
称取8.5gNaCl溶解于1000ml蒸馏水中，定量分装，121℃高压灭菌
15min备用。
0.1%蛋白胨水
称取1g蛋白胨溶解于1000ml蒸馏水中，定量分装，121℃高压灭菌
15min备用。蛋白胨水对细菌细胞有更好的保护作用，不会因为在稀释
过程中使检样中原已受损伤的细菌细胞导致死亡。
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