副流感病毒3型(Parainfluenzavirus,type3)

同义名：血细胞吸附病毒1型(Haemadsorptionvirus，type1)；运输热病毒(Shippingfevervirus)。〖HT5SS〗副流感病毒3型原始分离物称为血红细胞吸附病毒第1型，简称HA1病毒。它是1957年Chanock等从华盛顿1名患有急性呼吸道疾病的2岁患儿的咽拭子中，用猴肾细胞培养，根据红细胞吸附现象分离出来的。患者血清对新分离病毒有4倍以上抗体增长。我国于1962年从急性呼吸道疾病的患儿咽喉拭子中用猴肾也分离到2株HA1病毒，在法国、英国、澳大利亚、加拿大和美国等也有地方分离获得本病毒的报道。

(1)理化学特性病毒粒子的直径为120～180nm，含单链RNA，核衣壳呈螺旋对称，有外膜，含血凝素和神经氨酸酶。病毒的感染力和神经氨酸酶活性，在50℃30分钟可降低约90%～99%。在无血清的营养液中，37℃24小时，99%以上的病毒被灭活，在5%血清中病毒较稳定。在4℃1天或几天病毒感染力可保持不变，在-70℃可保持数月。相对湿度20%比80%更为稳定。用20%乙醚在4℃处理16小时可使病毒完全灭活，与等量氯仿在22℃处理10分钟也可使其完全灭活。本病毒对热的稳定性较其它副粘病毒为低，感染力在室温中迅速降低，几天后丧失殆尽。55℃30分钟灭活，在-25℃能良好活存。血清对其具有保护作用，可以降低灭活速度。

(2)血凝性所有副流感3型病毒都能凝集人“O”型、豚鼠和鸡的红细胞。新分离的牛株比人株更易产生血凝作用。马株凝集人和豚鼠的红细胞，但对鸡红细胞的活性较差。根据对不同红细胞的凝集作用和对热的敏感性，牛株又可分为2～3个亚型。牛株尚能溶解鸡或豚鼠的红细胞。欲从细胞培养物中检出新分离的毒株，以红细胞吸附试验最为敏感。

(3)抗原性与所有副流感病毒以及与其它副粘病毒之间都有交叉反应，但与正粘病毒没有共同抗原。应用中和试验、血凝抑制试验、血细胞吸附抑制试验、补体结合试验和琼脂扩散试验，可将人株和牛株加以区分。

(4)培养本病毒能够适应鸡胚，羊膜腔接种时生长良好。鸡胚液中产生血凝素。接种尿囊腔不能生长，这点与其它副流感病毒有别。新分离的病毒在细胞培养物中大多不能产生明显的细胞病变和血凝素，但用血细胞吸附试验容易检出。连续传代后可以产生细胞病变。牛株在犊牛、山羊、水牛、骆驼、马和猪的肾细胞培养物以及HeLa和Hep－2细胞培养物中生长良好，并形成大的合胞体以及不同大小和形状的嗜酸性胞浆内包涵体，核内也有圆形的单个或多个小包涵体。在每个包涵体的外周都有一层透明带。新分离的马株不易在鸡胚羊膜腔内生长，在猴肾细胞培养物中第一代没有细胞病变，培养10天可用血细胞吸附试验检出。连续传代后，马株可在鸡胚细胞内良好生长，产生明显的细胞病变，并形成嗜酸性胞浆内包涵体。在人羊膜细胞以及犬、猪和牛肾原代细胞、HeLa和犬肾传代细胞中也能良好生长。将副流感病毒3型和新城疫病毒同时或先后接种同一个细胞培养物时，副流感病毒3型有增强新城疫病毒增殖和产生细胞病变的作用。

(5)病原性本病毒是幼儿呼吸道疾患的常见病因，常从喉炎、支气管炎和肺炎的患者，特别是患病幼儿分离到病毒。成年人的呼吸道疾患由本病毒引起者少见。曾在捕获的猴中，发现由本病毒引起的一次肺炎死亡率高达50%。本病毒常自“运输热”病牛中分离到。血清学研究发现，健康牛血清中存在本病毒抗体者甚为普遍，因此认为本病毒广泛分布于世界各地。动物因受到不良因素的影响或因有其它微生物的协同作用而发病——自亚临床感染到致死性肺炎。病毒也可使马发生呼吸道疾病，在绵羊和羔羊中引起肺炎。曾从公牛精液和母牛生殖道中发现病毒，并可能导致不育。将牛株病毒实验接种犊牛，根据接种途径的不同，能引起发热、结膜炎、粘液－脓性鼻炎或阴唇－阴道炎等。剖检可在肺的肺叶发现大面积充血和实变。镜检证明小支气管和肺泡有炎症变化，上皮细胞融合，形成合胞体。胞浆内和胞核内都存在包涵体。本病毒对大多数实验动物无致病性，豚鼠和仓鼠可经鼻接种感染，但无明显症状。

(6)诊断病料采集：病毒通常存在于呼吸道分泌物、鼻腔分泌物、气管和肺组织。最好在感染后3～5天内用棉拭子采取鼻液。病毒分离培养、鉴定：分离牛株时最常用牛胚肾原代细胞；也可用牛肾、猪肾、猫肾、鸡胚和猴肾细胞等，某些传代细胞系也适用。接种后维持液应尽量避免加血清。病毒常产生细胞病变，在牛胚肾细胞培养物中能形成蚀斑。某些毒株产生的细胞病变不明显且缓慢，以致很难与细胞单层的正常退化现象相区别。在这种情况下，应用血细胞吸附试验常能较早地检出病毒，即在接种后3天用豚鼠或牛红细胞作试验。还可用副流感3型抗血清作抑制试验作进一步鉴定。此法迅速简单。但某些毒株需在体外适应后，才能出现红细胞吸附现象。在细胞培养物中分离获得的病毒株，大多能够凝集红细胞，并可用抗血清进行血凝抑制试验。血清学诊断：最常应用血凝抑制试验和中和试验。血凝抑制试验可用试管法和微量法，前法的滴度比后法高1～2倍。将病毒培养于牛胚肾原代细胞制备抗原，当细胞病变明显时收获培养液，冷冻保存。待检血清用高岭土处理后，在56℃灭活30分钟。快速诊断可用荧光抗体法或免疫酶技术。轻度感染的牛不出现临床症状，但血凝抑制滴度可达1∶40。感染后出现症状的牛，其血清的血凝抑制滴度达1∶320～1∶640或更高。滴度为1∶10～1∶40时，证明过去有过感染，与最近发病可能没有关系。由于抗体滴度在感染后2周升高，因此要检查急性期和康复期双份血清。如滴度增高4倍以上，即能肯定为最近感染。中和试验的血清样品用56℃灭活30分钟。一般应用固定病毒－稀释血清法。血清作1∶2～1∶256连续倍倍稀释，病毒剂量为100～500TCID５０/0.1ml。血清和病毒各01ml，混合后室温放置1小时，接种牛肾细胞培养物，35℃培养7天，中间检查一次，观察细胞病变或用豚鼠红细胞作血细胞吸附试验。人株和牛株之间有交叉反应，但同源血清的滴度较异源血清高。各地分离的牛株抗原性相同。