诊断急性新城疫的初步诊断，通常根据病史、临床症状和尸体剖检即可作出。但温和型新城疫较难作出确切诊断，在没有神经症状的情况下，可能与其它呼吸道疾病混淆，特别是在鸡群中本来就有其它呼吸道感染时，则必须进行病毒分离或血清学诊断。(1)病料采集从感染后3～5天病禽的呼吸道分泌物或肺组织中，很易分离到病毒。全身症状比较严重的病例，病毒很易从脾脏、血液中分离获得。脑组织的病毒分离率较低。接种过疫苗的鸡发生感染时，采集病料的时间应推迟至6～14天。(2)分离培养最好应用9～11日龄的鸡胚。种蛋必须来自健康母鸡，并且没有新城疫抗体。将病料作尿囊腔接种，置37～38℃培养，每天照蛋，连续5天。强毒和中等毒力毒株常使鸡胚在36～96小时死亡。鸡胚全身充血，头和翅等处出血，尿囊液清朗，内含大量病毒，呈现较高血凝性。弱毒株可能不使鸡胚死亡，但鸡胚液能凝集红细胞。可疑病料如果不使鸡胚死亡，不要轻易作出否定结论，应取鸡胚组织在尿囊液中磨碎，制成悬液，继续接种鸡胚盲传3代。在某些情况下需要接种易感小鸡时，可通过呼吸道或肌肉接种。(3)检查病毒抗原免疫组化技术能证明组织和器官中存在的特异性病毒或抗原，提供快速的诊断方法。气管切片或压片免疫荧光法和气管切片免疫过氧化物酶法已应用于NDV感染的检验。也可应用细胞培养物分离NDV，最好是鸡胚成纤维细胞或鸡胚肾细胞。有些毒株在细胞培养物中不出现细胞病变。如作蚀斑检查，覆盖琼脂中必须含有镁离子和DEAE才能使某些毒株出现蚀斑。蚀斑出现于感染后24～72小时。(4)血清学家禽血清中的新城疫抗体可被多种试验检出，包括血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、单相辐射免疫扩散、单相辐射溶血、琼脂扩散、鸡胚中和及蚀斑中和试验。其中血凝抑制试验是最常用的。酶联免疫吸附试验已普遍应用。作为鸡群监测程序的一部分而进行血凝抑制试验时，可采取待检血清，与已知血凝性良好的NDV作试验。尿囊液中可加入0.1%福尔马林将病毒灭活。待检血清作连续倍倍稀释，每一稀释度为0.25ml，与0.25ml已知病毒悬液(4个血凝单位)混合，静置5分钟后加入0.25ml0.5%～1%鸡红细胞。混合后置20℃～30℃经15～30分钟观察结果。当然也可在微量滴定板上进行微量血凝和血凝抑制试验。鉴定病毒时，将感染尿囊液与已知抗血清作同样检查。血凝抑制试验比中和试验简单快速。血凝抑制价在1：20以上者，肯定被检鸡过去患过新城疫或接种过新城疫疫苗。血凝抑制抗体在体内的持续时期比中和抗体短。对在细胞培养物中不产生细胞病变的毒株，可用血细胞吸附和血细胞吸附抑制试验加以鉴定。中和试验常用固定血清－稀释病毒法。过去从未接触过NDV的正常鸡血清能中和高达100ID50的病毒，因此必须高于此值才能判为阳性。在10～20天前感染新城疫的鸡，其血清通常能中和103～106ID50的病毒。NDV各毒株在抗原性上没有区别，但是产生中和抗体的能力却有差异。(5)病毒特性鉴定就NDV而言，普遍存在缓发型毒株，因而即使分离出NDV,也很难确诊本病。为了确诊，进一步作病毒特性鉴定，例如致病性试验是必要的。A.致病性试验由于以临床症状衡量病毒的真正毒力不一定可靠，有必要进行病毒致病性的实验室评估。有3种体内试验可用于此目的：①感染一个病毒最小致死量的鸡胚平均死亡时间(MDT)；②一日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)；③6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)。现将一些特性明确的NDV毒株通过上述3种方法检测取得的数值，列于表25-3。〖HT5SS〗B.体外致病性试验如上所述，只有NDV在F0的分裂位点上具有附加碱性氨基酸，胰酶蛋白酶等才可作用于F0,使其具有感染性。因此，NDV分离物在无胰酶的细胞培养上物形成蚀斑的能力，可成为一种简单的体外检查病毒毒力的方法。C.单克隆抗体NDV的单克隆抗体除用于常规诊断之外，在基本特性分析基础上，可将单克隆抗体用于对分离物的鉴定和病毒分组。这种以抗原特异性为基础的分型是诊断和流行病学分析的有力手段，能迅速分组和鉴别分离到的NDV。