摘要：本文通过采用基本培养基、诱导培养基和植物激素试验等探索利用菽北种茶外殖体进行快速组织培养的最适培养基．研究发现，用菽北种茶带腋芽的茎段做为外殖体进行组织培养可获得再生植株，并可建立快速无性繁殖系．实验表明，芽增殖最适培养基为1 / 2Ms + BA1.0mg/L + IBA0.2mg / L ；生根壮苗最适培养基为l / 4MS + BA0.5mg / L + IBAO.1mg / L + A13+0.01mg / L ．此外，还探讨了菽北种茶组织培养中褐变问题以及试管苗的移栽。
关键词：菽北种茶；组织培养；培养基
菽北种茶是日本国内的优良品种占日本茶叶种植面积的75 ％。菽北种茶1993 年从日本引种到我国，多年栽培表明，菽北种茶长势好、产量高、制作的茶叶品质优，适宜在信阳等地推广种植。日本政府禁止向我国出口种苗，所以我国藏北种茶的繁育问题显得十分必要。目前，国内对该茶繁育方法的研究并不多。袁正仿等研究出一套有效的菽北种茶扦插繁育方法，但该茶的组织培养中培养基的研究鲜有报道。本试验分别以菽北种茶的顶芽、节间和叶片为外殖体，探讨不同取材部位及不同激素配比对诱导、增殖分化和生根壮苗的影响，选择出了菠北种茶的最适诱导、增殖及生根培养基。本实验为菽北种茶的繁育方法研究开辟了新的途径，对菽北种茶的组织培养有一定指导意义。
1 材料和方法
1 . 1 实验材料 取自信阳罗山藩新乡和狮河区五云二茶场
1 . 2 实验方法选取菽北种茶的顶芽、叶片和一年生带腋芽茎段做为外殖体。所有材料均采用自来水冲洗干净，在超净工作台上用70％洒精浸泡1min ，然后放在0 . 1 ％的HgC12 溶液消毒3 次，时间分别为5min 、5min 、4min ，每次消毒后均使用无菌水冲洗四五次。消毒好的材料放在预先消毒过的滤纸上以除去水分，然后接人诱导培养基中。
1 . 3 培养条件基本培养基为Ms 培养基，pH 为5 . 8 ，蔗糖含量为3 % ，琼脂含量为0 . 75 ％。接种后材料置于（25 土2 ）℃ 的培养室内培养，每天光照12h ，光照强度约为1 200lx。
2 结果与讨论
2 . 1 基本培养基与芽苗形成的关系培养基是决定组织培养成败的重要因素。实验结果显示，决定培养基效率的因子除激素外还有矿物质。为了确定适合菽北种茶芽苗生长的基本培养基，我们分别采用了Ms 、N6 和white 基本培养基和无机盐，附加相同量的维生素、氨基酸、糖及植物激素，进行了比较试验。实验结果（表1）表明：菽北种茶外殖体在Ms 培养基中所形成的芽苗数及苗高度均优于其他两种基本培养基，故此后的试验均采用MS 做为基本培养基。
2.2 不同外殖体的诱导情况在培养基及其他条件相同情况下，为选择合适的外殖体，用顶芽、节间和叶片3 种外殖体进行诱导比较试验。结果（表2 滚明：由于顶芽在消毒过程中易受损伤，且在以后的培养过程中易褐化，所以诱导率较低。节间和叶片的诱导率都较高。虽然叶片在试验中诱导较快，但在以后的培养中易污染，主要是叶片比较粗糙，背面有绒毛，不易彻底消毒。因此，节间做外殖体诱导较理想，以后的试验均采用节间做外殖体诱导愈伤组织。
2 . 3 植物激素BA 和IBA 对增殖分化的影响 培养基中植物激素的状况，在诱导植物组织形成器官过程中起着重要作用。将菽北种茶外殖体上长出的无菌苗剪下，培养在附加了细胞分裂素BA0.5~2.0mg/L 和生长素IBA0.1~0.3mg/L的分化培养基中。培养结果（表3 ）表明：BA 和IBA 有明显促进芽苗形成作用，但浓度过高或过低都不利于芽的分化。当BA 浓度为0.1mg/L，IBA 浓度为0.2mg/L 配合使用时，分化率最高，增殖倍数也较大。当BA 和IBA 浓度继续增大时，虽然增殖倍数还逐渐增大，但是分化率却不变，茎反而逐渐缩短，叶极小。这种分化芽在以后的壮苗培养过程中，叶茎也不易伸长，从而影响了以后的生根培养和移栽。实验结果表明，要既能达到繁殖目的，又能得到壮苗，以BA1.0mg / L + IBA0.2mg / L 为宜。另外还发现用1 / 2Ms 比Ms 培养的芽苗要好，可能是MS 中所含有的无机离子浓度较高，对芽苗的分化起到一定的抑制作用。
2 . 4 生根培养将高度为1.5cm 以上的无根芽苗转到附加不同浓度BA 和IBA 的MS 培养基中诱导生根。实验结果（表4 ）表明：诱导菽北种茶芽苗生根以l / 4MS + BAO . 5mg/L + IBA0.1mg / L + AI3+ 0.01mg/L 为好，其生根率达到67 % ，且苗健壮，为移栽成活创造了条件。实验过程中用1 / 4 MS 比l / 2Ms 和Ms 效果都要好。如果在培养基中加人一定量的AI3+对生根有很大作用。实验结果（表5 ）表明：生根率与AI3+的浓度有一定关系，AI3+的浓度过高或过低都不利于生根.一定浓度的AI3+对生根是必要的，但其生理原因还不清楚。
2 . 5 继代培养 菽北种茶外殖体分化的芽每30d 转接1 次，转接二三次后将无根苗接人生根培养基中培养。30d 左右转接1 次，培养三四代后形成完整植株，将获得的完整植株用于试管苗的移栽。
2 . 6 试管苗的移栽当试管苗根长2.0cm 左右，根数二三条，苗高3 一5cm ，叶片4 ~ 6 片时，将瓶移到自然环境下炼苗4d 左右易成活。生根小苗从培养瓶中取出，用清水冲洗干净根部的培养基，栽于泥炭上做基质的培养袋中，浇透水，放人塑料大棚内，控制温度25 ℃ 左右，湿度90 % , 20d 后移到自然环境中，注意浇水、施肥。菽北种茶试管苗移栽成活率达90 % ，目前移栽成活的试管苗生长良好。
2.7 褐变问题植物组织培养中，外殖体常褐变，特别是含酚类物质多的木本植物尤为突出。本实验用2.0g/L的PvP 预处理外殖体，并在培养基中加入lg/L的活性炭溶液，拟防外殖体褐变，获得较好效果。这就为菽北种茶组织培养研究中如何阻止褐变的问题提供了经验和改进的路子。至于阻止菽北种茶褐变问题的生理依据还有待于进一步的研究。
3 结论
以菽北种茶的节间做为材料，在附加BA 2.0mg/L 的Ms 培养基上，诱导愈伤组织形成的效果最佳。在MS 培养基上附加BA1.0mg/L + IBA0.2mg/L ，生根效果最佳，并利于试管苗的移栽。当苗高3 一5cm ，每株根数二三条，根长2.0cm左右时，用泥炭土做基质，试管苗移栽易于成活。
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