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野菊嫩茎的组织培养二



录入时间:2009-7-13 11:05:59 来源:青岛银河澳门官网入口

2 试验方法
2.1
野菊嫩茎的选择
试验材料在2007 10 29 日上午10 : 00 采取。选生长健壮无病虫害的野菊植株,从新分生的枝条上剪取幼嫩带尖茎部15cm 左右,作为外植体使用。
2.2
野菊嫩茎的处理
将剪取的嫩茎带回实验室,将茎上的叶片连带叶柄一同剪掉,但叶柄基部留下5mm以保护侧芽,避免侧芽在灭菌过程中受损。将去掉叶柄的嫩茎剪成长约2cm 左右的小段。放在脸盆中用流水冲洗约5 min ,再用稀释的洗洁精漂洗约10 min ,最后用流水洗净,放人灭过菌的三角瓶中以待灭菌。灭菌时,将75 %的酒精倒人盛有嫩茎小段的三角瓶,接着倒出进行表面灭菌,而后用0.1 %的升汞溶液灭菌3 min ,最后用无菌水冲洗3 4 次,在超净工作台上将其接种于培养基上。
2.3
培养基的选择
由于野菊花同观赏菊花同科同属,据资料介绍,用于菊花培养的培养基有:MS 、White 、N6、B5等,一般采用MS 为基本培养基,添加各种激素进行培养图。诱导培养基为:MS BA 1mg/L + NAA 0.lmg/L , pH 5.8 左右,培养的温度范围是24 26 ,光照强度是1 500 3 00Olx ,每天照光约12h 。继代培养基为MS MS + BA 0.2mg / L NAA 0.5mg / L 的培养基上。生根培养基为1 / 2 MS NAA 0.1mg/L。另外,各培养基中均加琼脂粉5.5 g/L ,蔗糖30g / L.
2.4
组培苗练苗
将瓶苗移出培养室,放在准备室内,打开瓶口封口,将瓶苗室温放置2 3d 后,进行移栽。将实验田翻耕,使耕作层土层疏松,整理出畦。在土壤上面铺一层约5cm 的蛙石,浇透水。将小拱棚支架搭好备用。将双斜面小棚打成屋脊状或三角形,拱棚南北走向,中间设一条拉杆,可起到坚固抗风的作用阁。一般棚内相对湿度可达70 % ~ 100 % ,白天通风时,棚内相对湿度可保持在40 %一60 % ;夜间密闭时可达到90 %以上。棚内地温比露地高5 6 ,有利于再生苗的生长和提高再生苗成活率。当瓶苗根长至2cm 左右时,用镊子轻轻取出,用流水将瓶苗根部的培养基冲洗干净,然后栽在准备好的蛙石中,随后用喷壶浇一遍透水,将棚膜罩上,以水压边。白天气温过30 时用遮阳网遮荫。驯化过程中通过通风、遮荫、洒水使棚内温度白天保持在25 左右。待白天气温稳定在28 以上,生了新根约3cm时,可去膜移栽。3 结果与分析
3.1
野菊嫩茎侧芽的诱导及生长状况
接种后第2 天,野菊嫩茎外观呈嫩绿色,水渍状,与灭菌前无异。未发现染菌。第3 天野菊嫩茎体表有针尖般小黑点,极少部分腋芽已开始萌动,部分叶柄有于枯现象,未发现染菌。第4 天大部分野菊嫩茎体表水渍状消失,留有顶芽和侧芽的饱满嫩茎上的芽开始生长。部分叶柄短的嫩茎上部有褐色水渍状现象,这部分芽未萌发。第5 天野菊嫩茎体表水渍状消失,叶柄大部分干枯,侧芽萌发在90 %以上,大小如小米粒的一半,茎尖幼叶有展开迹象。第6 天野菊嫩茎茎尖幼叶已展开,侧芽大部分萌发。第8 天后多数芽已展开,茎段上黑点明显。第9 天幼芽生长良好,但展开的叶片边缘有焦枯现象。第10 天后部分茎尖呈水渍状,生长好的,叶片已完全展开,翠绿,叶面干燥。大部分芽生长良好,部分抽出了嫩枝(注:黑点为灭菌过程中升汞对其体表的损害;继代转接一次,培养基为MS + BA 0.2mg/L + NAA 0.5 mg/L )。
3.2
野菊嫩茎的继代增殖培养
当茎尖及腋芽萌发生长,长到距离瓶口约1 cm ,即高约6~ 7cm 时可进行增殖培养。嫩茎生长一段时间后,下部可分化出大如黄豆的棕褐色组织,但芽少有分化。将嫩茎上诱导萌发的腋芽切成数段,每段带1 1 叶,进行短枝接种增殖培养。将其基部插人MS MS + BA 0.2 mgL NAA 0.5 mg/L 的培养基上,约4 周后腋芽长成小植株。
3.3 瓶苗的诱导生根
野菊继代长成的小植株部分被转人生根培养基1 / 2 MS + NAA 0.lmg/L ,部分继续增殖培养MS BA 0.2 mg/L + NAA 0.5mg / L 。5d 后,有少部分瓶苗其根长至2 mm ,部分还处于根原基状态,只有小突起,大部分还是未萌动的。株高有所增加但不太明显。叶色黄绿,有些小叶已经干枯,但整体长势较好;8d 后,绝大部分已生根约2 mm,其叶色开始转绿,整体长势较好;9d 后,有少部分瓶苗根的长度已长至lcm ,大部分在0.5 ~0.7 cm 左右,株高无大的变化,但其粗度明显增加,叶色由黄绿转为绿色,长势较好。
3.4
组培苗练苗
练苗的野菊再生苗长势很好,仅在1 周左右即长出新根。2 周后其叶色浓绿,茎秆呈紫褐色或嫩绿色,粗壮。这时可进行移栽。
4
结语
该研究发现以野菊的嫩茎作为外植体进行组织培养,培养基要求不苛刻,诱导、继代培养及生根培养均可成功操作。并且瓶苗的练苗也非常成功,说明野菊再生根的能力很好。通过试验了解到,野菊的嫩茎可进行组织培养,而且见效快,为野菊的快速繁殖开辟了广阔的前景。

 

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