二、正痘病毒属(Orthopoxvirus)
〖HT5SS〗正痘病毒包括痘苗病毒、天花病毒、牛痘病毒、兔痘病毒、小鼠脱脚病病毒(鼠 痘病毒)、水牛痘病毒、骆驼痘病毒、马痘病毒和猴痘病毒等。痘苗病毒是代表种。正痘病 毒呈砖形，大小为200nm×200nm×250nm,各成员之具有共同抗原，且基因组之间可发生重组 ，血清 学上具有明显的交叉反应。感染正痘病毒的细胞和病毒粒子的外膜上均有血凝素蛋白，大多 能凝集火鸡和鸡的红细胞，但一些痘苗、兔痘HA-自然变异病毒株，不能凝集上述动物的 红细胞。正痘病毒 能感染源于哺乳动物的大多数培养细胞，但在自然界中有种属感染特异性。DNA长度为170 ～250bp, G+C含量为36%左右。
(一) 牛痘病毒(Cowpox virus)
牛痘是牛的一种良性疾病，发生于乳牛，主要侵害乳房和乳头的皮肤。一般通过 挤乳工人的 手或挤乳机而传染。干奶的母牛、处女牛、公牛、役用牛和肉用牛等很少发生牛痘。挤乳工 人可将新近接种的痘苗病毒传染给牛，症状与牛痘相同。
1.形态和理化学特性 牛痘病毒具有痘病毒的典型形态和理化学特性。基因组大小为222bp。在以水疱液制作的涂 片，经姬姆萨染色，镜检可以见到成熟的病毒粒子(原生小体)，应用镀银法染色，效果更好 。 牛痘病毒具有血凝素，可以凝集火鸡和鸡的红细胞，但其效价较低。
2.抗原性 〖HT5SS〗牛痘病毒在抗原性上与痘苗病毒和天花病毒极为相似。它们之间的微小抗原差 异(有人认为 仅是量上的差别)，可用交叉补体结合试验、琼脂扩散试验和抗体吸收试验检出。中和试验 的特异性更高。
〖BT4〗3.培养 牛痘病毒可在鸡胚绒毛尿囊膜上良好生长，并产生出血性痘斑，这是病毒易于侵害中胚层 组织，损伤毛细血管的内皮细胞的结果。大量感染时，鸡胚可能死亡。但在40℃以上的温度 中不能产生出血性痘斑。近年来多次发现引起白色痘斑的突变株。 牛痘病毒可在许多种类的组织培养细胞中生长，于鸡胚细胞以及人胚肾和牛胚肾等细胞培 养物内形成蚀斑、合胞体和细胞膨胀等细胞病变。
〖BT4〗4.病原性 病毒在自然条件下只侵害母牛乳头和乳房的皮肤。潜伏期为3～8天。病初体温可能略高，食 欲降低。挤乳时乳头和乳房比较敏感，局部温度稍有增高。此后不久，在乳头和邻近的乳房 皮肤上出现几个至10多个红色丘疹，1～2天后变为豌豆大的水疱，内含棕黄色或红色的淋 巴 液。此后几天，水疱中心塌陷，边缘隆起而呈现脐状，并迅速化脓，最后结痂，整个病程约 3周。痂皮脱落后，形成白色凹陷的疤痕。水疱可能融合，并常在挤乳时破裂，残留鲜红色 的创面。在无细菌 继发感染时，病牛常无全身症状。 〖HT5SS〗本病一旦传入牛群，即迅速传播，直到所有母牛均被感染为止。 并常传染给挤乳工人，在其手、臂甚至脸部出现痘疹，比初次接种痘苗时的病变 还要强烈，病灶常常坏死。 实验感染时，牛痘病毒易于感染家兔、豚鼠、小鼠和猴。Marennikova等(1975)报道， 在莫斯科动物园的狮子和穿山甲曾暴发过牛痘。牛痘病毒亦可感染象和虎。除皮肤病变外 ，某些动物还发生致死性肺炎。
〖BT4〗5.免疫 牛痘痊愈后，可以获得长达几年的免疫力。应用痘苗接种，也能预防牛痘的感染。但因牛 痘并非为严重性疾病，且不普遍发生，故只在特定情况下才考虑应用痘苗接种。 〖BT4〗6.诊断 根据乳头和乳房皮肤上的特异病变及在牛群中迅速传播的流行病学特点，可作出诊断。确 诊时最好采取水庖液，以磷钨酸负染后作电镜检查，不仅可以看到典型的痘病毒粒子，并可 直接与假牛痘病毒(副痘病毒)、口蹄疫病毒、牛溃疡性乳头炎病毒(疱疹病毒)和牛乳头状瘤 病毒相鉴别。 基层实验室可用外科小刀刮取丘疹部皮肤的上皮细胞，或者吸取痘疱内容物，同时刮取痘 基部细胞，涂片后用银染法染色，于光学显微镜的油镜头下检查，可见暗褐色呈现椭圆形或 长方形的 病毒粒子，与标本中污染的葡萄球菌相比，直径仅为葡萄球菌的1/3左右。病毒粒 子呈短链锁状或成对排列。 也可将水疱液接种鸡胚、单层细胞或皮肤划痕接种于家兔的皮肤或眼角膜。牛痘病毒经常于 鸡 胚绒毛尿囊上形成红色的出血性痘斑。家兔角膜在划痕接种后，第二天在划痕处发生小的 透明增生，滴上可卡因，切下角膜制备标本，HE染色，可以发现胞浆内的包涵体。如将角 膜 用升汞和酒精固定，可见明显的圆形混浊斑点。皮肤接种的家兔，出现痘疱，并伴有 宽大的炎 性红晕。接种病毒的单层细胞，例如鸡胚细胞和牛胚肾细胞等，在感染后1～2天产生蚀斑和 细胞病变，并因胞浆突起伸长而呈网状。感染细胞内出现嗜酸性大型A型包涵体。 如果用化脓的痘疱液或痘疱皮、痂皮作为接种材料，则应充分磨碎，并用青、链霉素处理后 应用。 取痘疱材料制成涂片，应用荧光抗体染色，可以检出病毒抗原，但因非特异性荧光较强，判 定必须慎重，并应设置多种对照。如果先将病料接种组织培养细胞，孵育1～2天后再用荧光 抗 体染色，结果比较可靠。应用痘疱液作抗原，与高价免疫血清进行琼脂扩散试验，通常可 在 4～5小时出现特异沉淀线。但如没有各种特异性抗原作为对照，则难于与痘苗病毒和天花病 毒鉴别。 补体结合反应的敏感性较高。通常采取痘疱液，用生理盐水作1：5稀释，1 500r/min离心 沉 淀15分钟，取上清，58℃加温30分钟，作为待检抗原。如系痂皮，则取1g置干燥缸内干燥 4～5小时，用玻璃粉磨细，并加5ml乙醚，振荡10分钟，静置顷刻，吸去乙醚，并置37℃ 加 速乙醚蒸发。用生理盐水将磨细的痂皮作1：20～1：50稀释，室温浸渍2小时，经常振 荡，然 后以1 500r/min离心沉淀15分钟，吸取上清液，58℃加温30分钟，作为待检抗原。用高免血 清 按常规方法作补体结合试验。高免血清一般用家兔制备，即以牛痘病毒对家兔胁腹部作划痕 接种，待其形成痘疱并结痂，4周后采其血清即成。补体结合试验也须设置多种标准抗原对 照，才有可能测出牛痘病毒与痘苗病毒和天花病毒之间的抗原差异。
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