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马流感病毒



录入时间:2009-7-9 13:51:12 来源:青岛海博

马流感病毒(Equineinfluenzavirus)
马流感是早有报道的疾病。Short(1749年)最早认为马流感与人类疾病可能有关。他谈到1688年在英格兰和爱尔兰发生人流感前,马就有类似人流感的症状。Thompson(1852年)也报道了1732年在英国爱丁堡发生人流感之前,有不少马匹发生咳嗽、流鼻涕等症状。Gibson(1754年)对这次马流感作了详细的记载,其临床症状和流行病学与现今观察到的马流感情况完全相符。现已充分证明,人和动物的流感病原是同属于正粘病毒科的流感病毒。不过在1955年以前,由于马流感的病原体尚未搞清楚,因而文献上所叙述的“马流感”,可能包括有马鼻肺炎、病毒性动脉炎、马传染性支气管炎、鼻病毒感染以及由流感病毒引起的马流感等多种疾病。近些年来,通过病原学和免疫学研究,对于上述各种疾病的病原体已经认识清楚。1956年Sovinova等在布拉格从流感病马体内分离出一株病毒,经鉴定为甲型流感病毒。命名为A/马/1/布拉格/1/56(即马甲1型);1963年Waddell等在美国的迈阿密州,从马体又分离出一株在抗原性上与马甲1型流感病毒不同的甲型流感病毒,命名为A/马/2/迈阿密/1/63(即马甲2型)。到目前为止,马流感病毒只有这两个在抗原性上不同的亚型。这两个亚型病毒具有甲型流感病毒共有的补体结合性抗原,但血凝抑制试验和病毒中和试验有区别。根据多年来在各国所作的抗体调查和病毒分离试验结果,证明由这两株病毒引起的马流行性感冒,广泛分布于世界各地。马甲1型流感曾发生于瑞典、捷克斯洛伐克、罗马尼亚、前苏联、美国、墨西哥、丹麦、澳大利亚、德国、荷兰、波兰和英国;马甲2型流感曾发生于美国、巴西、英国、法国、乌拉圭、阿根延、意大利、罗马尼亚、澳大利亚、前苏联和日本。1974年夏到1975年春,我国一些省份也暴发了马流感,经过血清学检查以及病毒的分离和鉴定,证明是由马甲1型流感病毒引起的。1989年春又在东北地区发现了马甲2型病毒引起的流行,并且分离到了病毒。
〖BT4〗1.抵抗力〖HT5SS〗马流感病毒对外界抵抗力很弱,56℃加热数分钟即可丧失感染力。对紫外线、甲醛、稀酸等敏感。脂溶剂、合成去污剂、肥皂和氧化剂都能使病毒灭活。对低温的抵抗力较强,传染性鼻分泌物于5℃保存二天,仍可分离出病毒。在-20℃以下,病毒的活力可保存数月之久。
〖BT4〗2.培养〖HT5SS〗马流感病毒最易感染鸡胚,因此鸡胚最常用于病毒的分离培养。将被检病料接种于9~11日龄鸡胚的羊膜腔和尿囊腔内,35℃培养2~4天,可在羊水和尿囊液中获得大量的病毒。马流感病毒能在鸡胚成纤维细胞、仓鼠肾细胞、猴肾细胞、牛肾细胞以及仓鼠肺传代细胞培养物内增殖,但以鸡胚细胞培养物内的病毒感染价最高。也有用马肾细胞初代分离马流感病毒(马甲2型)获得成功的报道。感染细胞培养物内细胞病变的特征是形成合胞体,细胞肿胀变圆,稍晚则出现核圆缩,甚至脱落,并出现血凝和红细胞吸附特性。Yamagishi等比较了非洲绿猴肾(Vero,GMK-2)、牛肾(MDBK)、犬肾(MDCK)、猪肾(SK-K)以及来源自猪胚肾(ESK)的传代细胞系对马流感病毒迈阿密株和布拉格株的敏感性。结果证明这两株病毒均能在所有这些细胞系中增殖,并有致细胞病变作用,细胞变圆、聚团和最后崩解。但以来源自猪胚肾的ESK细胞最为易感。马流感病毒经鼻腔感染,可逐渐适应于小鼠,盲传数代后可使小鼠发生肺炎。部分或多数小鼠死亡。乳鼠经脑内注射马流感病毒可引起脑炎。对仓鼠经鼻接种病毒,也能引起感染。
〖BT4〗3.抗原性〖HT5SS〗马甲1型流感病毒的抗原组成为H7N7,马甲2型流感病毒的抗原组成为H3N8。如按1980年2月世界卫生组织会议所建议的流感病毒命名法,则马甲1型流感病毒的HA抗原与人流感病毒H3和禽类流感病毒H7相同;但在自然条件下,马和人流感病毒的种间交叉感染是不存在的,也没有交叉保护作用。马甲1型和马甲2型两个亚型病毒之间,也不能产生交叉免疫性。
〖BT4〗4.病原性〖HT5SS〗自然条件下,马流感病毒只引起马属动物发生流行性感冒,无年龄、性别、品种的差异。主要经呼吸道飞沫感染,亦可通过被污染的饮水、饲料经消化道感染,还能通过交配传染。病马退热后可能较长时间带毒和排毒,成为传染源。本病一年四季均可发生。北方地区以春夏之交多发。本病传播迅速,在易感畜群中短期内引起广泛流行,发病率极高,有时可达100%。马匹感染流感病毒后,经过1~3天的潜伏期,突然发生高热,有时可达40~41℃。呼吸、脉搏加速,精神沉郁,食欲减退。鼻粘膜潮红,发热时伴有干咳,后变湿咳,鼻孔有浆液性~粘液脓性分泌物。病马流泪、羞明,眼睑肿胀,伴有浆液—粘液乃至脓性分泌物。通常流感病马的症状比较一致,但由于病毒的毒力大小、个体抵抗力的强弱以及饲养管理的好坏而有所差别,主要在于轻重程度之分。病死率一般为01%~04%,不超过1%。但对未受母源抗体保护的幼驹,可较多地引起致死性感染。如在发病时或病愈后继续使役,可能引起严重的并发症,特别是胃肠炎和肺炎,则死亡率增高,有时超过5%。流感病毒经呼吸道侵入马体,对呼吸道粘膜有特别的亲和力。病毒侵入细胞后几小时,便在细胞内形成很多成熟的病毒粒子。随着感染细胞的破坏,病毒释放于呼吸道内,感染更多的粘膜上皮细胞,当病毒在上皮细胞内增殖达一定程度时,就引起局部组织的病理变化和全身症状。
〖BT4〗5.免疫〖HT5SS〗马流感病毒感染的获得性免疫是持久的。自然感染后的康复马有较长时期的免疫力。体内血凝抑制抗体也可保持相当长的时间。曾对1974年夏至1975年初在我国暴发的马甲1型流感自然感染后的部分康复马,逐年进行了血凝抑制抗体的水平调查,结果证明这些马匹至1980年仍保有一定水平的血凝抑制抗体。疫苗预防也有良好效果。目前使用的疫苗是以鸡胚增殖的马流感病毒,将其精制浓缩和灭活后制成的。有水剂疫苗和佐剂疫苗两种。如前所述,马流感病毒有马甲1型和马甲2型两个亚型毒株,通常就用这两个亚型毒株作为种毒制备疫苗。但是,各次流行时病毒抗原结构经常有变化,可能影响疫苗的预防效果。因此,应考虑使用当地流行时分离出来的毒株制备疫苗,其免疫效果更为理想。疫苗制造时,先将保存的马流感种毒,进行传代,提高和稳定种毒的血凝效价。马甲1型和马甲2型可以制成二价疫苗。二价疫苗不仅使用方便,免疫效果也较理想。现将疫苗的制备程序简要概括如下。按常规将保存的两个亚型种毒启封后,进行鸡胚传代,当血凝滴度稳定在1∶640以上时,即可作为种毒使用。应用9~11日龄的鸡胚增殖病毒,经尿囊腔途径接种病毒尿囊液02ml后,置33~35℃温室中培养48小时。随后将鸡胚移至普通冰箱过夜,以减少出血。翌日将鸡胚取出,按无菌操作程序将尿囊液吸出,收集于灭菌瓶中。立即进行无菌试验和血凝效价测定。而后向感染尿囊液加入5%福尔马林,使福尔马林的最终含量为005%,加塞并充分振荡后,置于4~8℃冰箱中进行灭活,持续7天,每天振荡一次。灭活期满后,取样进行病毒灭活效果试验。应用福尔马林灭活苗免疫马,所产生的免疫保护作用仅能维持3个月,这一方面取决于疫苗自身的免疫原性,更重要的是马匹本身对疫苗免疫的反应能力。为了提高疫苗的免疫力,可加入氢氧化铝或油类等佐剂。检定合格的单苗,按马甲1型1∶640血凝价、马甲2型1∶2560血凝价的比例,将两种单苗混合后即为二价疫苗。关于马匹的免疫注射程序问题,实验证明马匹在第一年以三个月的间隔接种二次,以后每年接种一次即可。免疫母马所产的幼驹,可通过初乳获得1~2个月的被动保护力。这些幼驹,应在3月龄注射疫苗,6个月再强化注射1次。高免血清也能提供近3周的保护力,主要用于易感幼驹和贵重种马。关于马流感弱毒疫苗的应用,尚未见有报道,其主要原因在于注射后能引起全身反应。
〖BT4〗6.诊断〖HT5SS〗本病发病快,传播迅速,几天内便可波及全群马属动物。且无年龄、性别的差异,而临床症状又比较一致。根据这些临床表现和流行病学材料,通常即可作出初步诊断。实验诊断多采用血清学试验或病毒分离。常用血凝抑制试验测定患畜的急性期和恢复期双份血清,如抗体升高4倍以上,即可诊断为流感病毒感染。急性期血清应在病马发病2~3日内采取,恢复期血清最好在发病后2~4周采集。双份血清必须在同次试验和相同的条件下进行,以保证结果的可靠性。血清抗体检测方法还包括ELISA、单向辐射溶血试验(SRH)等。病毒定性诊断方法有荧光抗体法、间接荧光抗体法等。病毒分离一般采取急性期病马鼻腔分泌物,以羊膜腔(或同时接种尿囊腔)途径接种9~11日龄鸡胚,置35℃孵育3~4天后,分别收获尿囊液和羊水。取收获物一部分作血凝试验,另一部分继续作鸡胚继代。如出现血凝,可与标准阳性血清作血凝抑制试验、最后定性。经鸡胚盲传3~5代仍为阴性的标本,判为阴性结果。

 

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