铁皮石斛组织培养研究进展三
录入时间:2009-7-9 10:49:52
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5 其他外植体的离体培养
除种子作外植体外，以铁皮石斛的茎尖、茎段、幼叶、种胚苗、幼根为外植体，均可培育出组培苗。以茎尖、茎段为外植体，培养途径为茎尖、茎段一诱导形成不定芽～不定芽增殖～不定芽分化～生根壮苗，形成完整试管苗。
5.1 不定芽诱导
曾宋君等比较N6、MS 、KS 、VW 、KC 等培养基，以MS 为基本培养基效果较好。朱艳等比较1 / 2 MS 、B5、改良N6 、KC 等4 种培养基对茎段分化丛生芽的影响，结果表明以1 / 2 MS 诱导丛生芽效果最好。张伟等比较N6、MS 、1 / 2N6、1 / 2 MS 等培养基对试管苗生长的影响，结果表明，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以改良N6 最佳，MS 次之。张启香等比较l / 2MS 、MS 、VW 等培养基，结果表明以1 / 2MS 诱导效果最好。周俊辉等比较N6、B5、MS 、KC 等4 种基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的影响，以B5效果最好。NAA、6 - BA、KT、IBA、LH在不定芽诱导过程中具有良好的促进作用，NAA 浓度通常0.1~0.5mg/L, 6 一BA 浓度通常0.5 一2.0mg/L。
5.2 不定芽增殖
将丛生芽切割后继续在此培养基上培养，可增殖产生大量丛生芽。在不定芽增殖培养中可添加香蕉汁、土豆汁、椰子汁等天然附加物，周俊辉等认为添加椰子汁对芽的增殖效果最好。
5.3 生根壮苗
生根壮苗适宜的培养基有N6＋10 ％香蕉汁，1 / 2 MS 十IBAO.lmg/L，l / 2MS 十10 ％香蕉汁十0.5 % AC，改良N6十0.2mg/L NAA + 10 ％香蕉汁，MS + NAAO.05 mg/L , + KTO.1mg/L,＋叶酸2.0mg/L+ La稀土10mg/L，1 / 2 MS + NAAO.7mg/L等。在生根培养基中通常加入香蕉汁、蔗糖可促进生根壮苗。
6 讨论与展望
6.1 菌根技术和试管苗移栽
关于铁皮石斛组织培养的研究目前已取得一定的进展，成功培育出试管苗，但有关试管苗移栽方面的报道还很少，目前普遍存在移栽成活率低，苗期管理困难的问题。郭顺星等从野生铁皮石斛中分离获得内生真菌25 种，其中5 种真菌可促进铁皮石斛种子萌发，7 种真菌可与铁皮石斛幼苗形成共生关系，3 种真菌对幼苗生长有促进作用。因此分离和筛选促进铁皮石斛生长发育的适宜菌根真菌，是提高试管苗移栽成活率，解决生产的关键问题之一。朱艳等比较不同基质对铁皮石斛试管苗移栽成活率的影响，结果表明最适宜的基质是1 / 3 泥炭十1 / 3 锯末＋1 / 3 珍珠岩，覆以苔鲜类伴生植被可大大提高移栽成活率。李进进等研究了栽培基质和扩繁代数对移栽成活率的影响，移栽的基质以松树皮与碎石、花生壳与碎石综合效果较好，移栽成活率达到95 写以上。原球茎繁殖代数应控制在4 代内，茎段繁殖代数应控制在6 代以内，否则会明显降低移栽成活率。
6.2 组织培养次生代谢产物的研究进行组织培养研究时，直接以组织培养物替代原药材使用或者生产活性成分也是解决铁皮石斛资源短缺的方法之一，但目前涉及该方面的研究还很少。黄民权等从铁皮石斛愈伤组织中提取到的水溶性多糖含量达21.0 % ，愈伤组织培养物和它的原植物二者在多糖含量，多糖的单糖化学组成等方面存在明显的相似性。张东青等研究表明铁皮石斛原药材及其试管培养物的多糖含量均在10 ％以上，以原药材的含量最高。因此，以愈伤组织培养物替代它的原植物具有广阔的前景，值得进一步的研究和开发。
6.3 展望
顾慧芬等研究表明，铁皮石斛组培苗和野生品多糖含量基本相同。范俊安等对植物形态及茎、叶等组织构造的对比研究和总多糖含量比较表明，铁皮石斛组培品和野生品植物形态相似，组织结构基本相同，主要成分总多糖含量无显著性差异，二者药材品质相近。因此，铁皮石斛试管苗经大田栽培后可替代野生药材，通过组织培养培育大量试管苗，发展铁皮石斛人工栽培是解决铁皮石斛资源紧缺问题的有效途径。
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