隆病毒属(Torovirus)隆病毒属是冠状病毒科中新增加的1个属。其成员主要包括马伯尔尼(Berne)病 毒、牛布里达(Breda)病毒及人隆病毒等。其中马伯尔尼病毒为本属病毒的代表种。自1972年在瑞士首都伯尔尼首次发现马伯尔尼病毒以来,有关隆病毒感染的报道已见于瑞 士、美国、英国、法国和德国,但免疫学试验表明,在奥地利、荷兰等欧洲国家以及北美洲 的某些动物都存在这类病毒的感染。1.形态结构本属病毒形态多样,主要呈球形、卵园形和肾形,最大直径120~140nm,有时呈 棒状,大小35×170nm。有囊膜,囊膜表面带有纤突,约20nm,纤突末端呈球状。核衣壳呈 长管状,螺旋对称,并在囊膜内卷曲成环状,见图23-5。 图23-5伯尔尼病毒(左)和布里达病毒(右)的形态结构2.理化学特性S20w=380~400,蔗糖浮密度为116~117g/cm3,在pH25和pH97 中稳定。RNA为正股单链线状,大于20kb,有感染性,3'末端具有poly(A)尾。病毒粒子有3种主要蛋白质:核衣壳蛋白,分子量约为18×104Da;囊膜蛋白,分子量 约为26×104Da;纤突蛋白,分子量约为80×104~100×104Da,是由前体经加 工而成,前体分子量为20×105Da。纤突蛋白为糖基化蛋白。3.生物学特性①病毒粒子在胞浆内增殖,超薄切片可见球形、椭园形或长条状病毒粒子在胞浆 膜上大量堆集。核衣壳主要在高尔基体和粗面内质网上以出芽方式增殖,病毒增殖需要 宿主细胞的辅助。②在细胞浆中,发现有5种亚基因组mRNA,它们具有相同的3'末端,聚合酶基因有两个相 重叠的阅读框架(ORF),靠下游的1个ORF在基因组翻译时由核糖体移位而表达。③病毒的增殖可被放线菌素D、α蝇蕈素及紫外线等抑制。④伯尔尼病毒和布里达病毒均有血凝性。现已证明,伯尔尼病毒能够凝集人、兔和豚鼠的红 细胞,且对上述3种动物红细胞的凝集能力依次减弱。而对大鼠、鹅、鸡或马的红细胞未发 现有凝集作用;布里达病毒则能凝集小鼠和大鼠红细胞,对人“O”型、牛、仓鼠、豚 鼠、鸡、火鸡和鹅红细胞均没有凝集作用。4.病原性目前所知,已鉴定的隆病毒可能通过粪口途径,引起肠道感染。感染宿主范 围主要是有蹄动物和人,可能还有肉食动物如鼬科动物等。在有蹄动物未发现垂直传播。 5.抗原性利用血清中和试验、血凝抑制试验及放射免疫沉淀试验等,发现病毒最少有4种特 异性 抗原。中和性单克隆抗体能够识别纤突糖蛋白,亦能抑制其血凝性。本属病毒在抗原性上, 与冠状病毒、披膜病毒和副粘病毒等无相关性。
(一)伯尔尼病毒(Berne virus)1972年 Steck在瑞士首都伯尔尼(Berne)进行马群常规检查时,从1匹马的肛门拭子 材料中分离到1种细胞致病颗粒,该马于采样后1周死亡,剖检发现,消化道有假膜性 肠炎,肝脏有粒状肉芽肿和坏死灶,当时误认为是由沙门菌引起的,但后来证明其真正的 病原是1种病毒。由于该病毒是在伯尔尼首先发现的,故称为伯尔尼病毒。1.形态结构具有隆病毒的典型形态结构,呈多形态性,如双凹碟状、肾形、球形或棒状,大 小120~140nm,有囊膜,囊膜纤突长约20nm。核衣壳长约104nm,宽约23nm,呈杆状、星月 状或开环状包于囊膜内,呈螺旋对称。2.理化学特性含有单链线状RNA,具有感染性。沉降系数为400S,蔗糖浮密度为116g/cm3 。对热敏感,在31℃~43℃之间均可使其灭活。置-20℃以下保存可保持感染性,但4℃ 保存92~185天感染性即丧失。冻干或22℃干燥其活性丢失不明显。在pH25和pH103中稳 定 。紫外线和Triton X100可使其迅速灭活。对蛋白酶敏感,但对胰酶不敏感,而且经胰酶 处理后,其感染性提高。3.培养伯尔尼病毒初次分离时应用马传代肾细胞,并可在该细胞上做中和试验。随后 该病毒又适应于驴胚皮肤细胞和马肾细胞。电镜观察细胞培养物的超薄切片,可见 到病 毒从胞浆膜上出芽。如在细胞培养物里加入放线菌素D,则可干扰伯尔尼病毒的复制,这与 冠状病毒恰 好相反。用紫外线照射驴胚皮肤细胞培养的伯尔尼病毒,其滴度亦明显下降。4.病原性伯尔尼病毒除感染马外,其它动物如绵羊、山羊、 猪、兔及部分野生小鼠也存在其抗体,而犬、猫和狐狸则未检出抗体。5.诊断 根据流行病学和临床症状,结合电镜观察,可作出初步诊断。确诊本病须应用血 凝和血凝抑制试验、中和试验和ELISA等方法进行特异性诊断。
(二)布里达病毒(Breda virus)1979年,Woode等 人在美国衣阿 华州布里达(Breda)地区从腹泻病牛中发现了1种新病毒,这种病毒在电镜下其形态不同 于已知的肠炎病毒,当时称之为非典型冠状病毒,但血清学试验证明它与冠状病毒毫无关系 。由于该病毒是在布里达发现的,故称之为布里达病毒。随后,在衣阿华州 和俄亥俄州又相继分离到两株布里达病毒,应用血清学方法将这两株病毒分为2个血清型, 分别为布里达病毒1和布里达病毒2。布里达病毒粒子有囊膜,囊膜外有纤突,纤突较 短 ,为76~95nm。卵圆型病毒粒子的大小为89×75nm,肾型粒子为120×32nm,沉降系数 为3 50S, 蔗糖浮密度为117g/cm3。具有血凝性,能凝集小鼠和大鼠红细胞,但对人“ O”型及牛、仓鼠、豚鼠、鸡、火鸡和鹅红细胞不 凝集。布里达病毒还能吸附大鼠红细胞, 布里达病毒1吸附红细胞后不能洗脱,而布里达病毒2吸附后可以洗脱。布里达病毒在 原 代犊牛肾细胞、原代牛胸腺细胞、人直肠癌细胞(HRT18)及MDBK和牛气管培养均未获成功, 对鸡胚也无致病性。布里达病毒人工接种悉生犊牛可引起严重腹泻,荧光染色表明病毒在空肠和十二指 肠粘膜以及结肠袢中复制。病理变化类似于轮状病毒和冠状病毒感染。粪便排毒3~4天。自然感染主要引起2~20日龄犊牛腹泻,发病高峰在3~5日龄。临床症状与人工感染 的相 同,主要为水样腹泻、食欲废绝,不久即站立困难或不能站立。
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