猪血凝性脑脊髓炎病毒(Hemagglutinating encephalomyelitis virus of pig) 同义名:仔猪呕吐消耗病病毒(Vomiting and wasting disease virus)。猪血凝性脑脊髓炎是幼猪的1种急性、高度传染性病毒病。患病仔猪以呕吐、进行性消瘦及 中枢神经系统功能障碍为特征,死亡率很高。五十年代后期,在加拿大安大略州的乳猪中发现两种疾病。1958年,Roe和Alexander将 其中1种称为呕吐消耗病(VWD);1959年,Alexander将另1种称为安大略脑脊髓炎 。 但后者除发生脑脊髓炎,呈现中枢神经系统障碍,病程较急(3~5天)之外,其它方面与呕吐 消耗 病极为相似。其后分别从这两种病猪身上分离到病毒,并证明这两种病是由同1种冠 状病毒引起的,将这种病毒命名为血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)。本病在世界各地分布很广,近年来欧美很多国家如加拿大、英国、美国、比利时、瑞士、法 国、德国、澳大利亚等相继有所报道。我国台湾省母猪的阳性率也很高。
1.形态特征病毒粒子一般呈圆形。电镜观察时的直径为100~150nm,内有1个致密的核 心,直径为70~130nm。外围有囊膜,囊膜上有梨状纤突,长20~30nm。据对1株HEV(67N株) 病毒 粒子(不包括纤突)的测定,直径为70~100nm(平均90nm),纤突的长度为15~17nm。因此, 完整的67N株病毒粒子的直径约120nm。
2.理化学特性本病毒含RNA。羟胺和嘌呤霉素能干扰猪肾细胞内的病毒复制,卤化脱氧尿核苷和 金刚胺则不起作用。67N株在氯化铯中的浮密度为121g/cm3。加拿大株的酒石酸锑钾浮 密度为181g/cm3。病毒对乙醚、氯仿和去氧胆酸钠等脂溶剂敏感,以乙醚处理后,病毒失去血凝性和感染性。 病毒对热敏感。56℃5分钟即被灭活,在37℃只能存活24小时。但在低温和冻干时较稳定。 在冰冻状态下活存1年以上。含毒培养液的低压冻干制品长年不丧失感染力。
3.血细胞凝集和吸附作用病毒凝集和吸附小鼠、仓鼠、大鼠、鸡和火鸡的红细胞,但不与豚鼠、犊牛 、绵羊、猪、鹅、马、兔和人的红细胞发生作用。红细胞受体不被受体破坏酶破坏,经受体 破坏酶处理的红细胞,仍能为HEV所凝集。因为病毒缺乏神经氨酸酶,吸附的红细胞不能 洗脱。粘液素能抑制血凝。测定血凝效价时,可取已经洗涤的05%鸡红细胞悬液05ml(pH 72 PBS),加入到等量的连续2倍稀释的各管病毒液中,22℃孵育1小时后,观察结果。引 起细胞凝集的最大稀释倍数的倒数,即为其血凝效价。检查红细胞吸附作用时,先将感染细 胞培养液弃掉,加入等量的01%红细胞液(以Earle液配制),经10、20、30分钟以及数小 时后,检查培养物,看有无红细胞吸附现象。
4.抗原性通过血细胞凝集抑制试验和病毒中和试验,证明HEV现有各毒株都是同型的。英国 的呕吐消耗病毒株与加拿大的HEV毒株也有密切的抗原关系。曾有1个被称为HEV 18株的猪 血凝性脑脊髓炎病毒,虽能在猪肾细胞培养物上产生多核融合细胞,但与已知的HEV毒株都 无亲缘关系。最近被鉴定为副流感3型病毒。HEV与传染性胃肠炎病毒以及其它冠状病毒没有 抗原关系。
5.培养HEV能在原代猪肾细胞和猪甲状腺细胞的胞浆内增殖,并以向胞浆空泡内出芽而成 熟。不能在猴、牛、羊、兔和小鼠细胞上生长。其特征性细胞病变是多核巨细胞的形成。 在接种病毒后12~16小时即可见到多核巨细胞(融合细胞)。早期多核巨细胞的形态不 定,通常略呈圆形,含有许多折光体,这些折光体就是核。幼龄巨细胞,胞浆十分清晰。随 着培养时间的延长,细胞增大。在早期,1个细胞只含几个细胞核。至后期,1个细胞可含 40个以上的细胞核,均聚集于细胞的中心区。巨细胞的发生较快,出现退行性变化也快。形 成后数小时,许多多核巨细胞的胞浆内形成空泡,核浓缩致密化,继而变得比较不透明,最 后卷缩,形成不规则的细胞块,并从细胞层脱落,漂浮于培养液中。这种细胞病变一般在48 小时内完结,此后只残留一些有抵抗力的细胞。在某些巨细胞的胞浆中能看到类似胞浆内包 涵体的结构。在染色片上,这些呈蓝色的小体形态为颗粒状,不规则,位于胞浆空泡内。这 些小体并 不常见,而且与巨细胞的发展阶段没有关系。未曾见到核内包涵体。
6.病原性本病毒只侵害1~3周龄的乳猪,不感染其它动物。被感染的乳猪可出现两种病型 :1种以脑脊髓炎症状为主;另1种以呕吐消耗病为主。两者可能出现某些共同症 状。脑脊髓炎型多发生于两周龄以下的仔猪。首先表现厌食,继而发生昏睡、呕吐和便秘,病猪 聚堆,被毛逆立,末端发绀,并常呈现喷嚏、咳嗽和磨牙等症状。大多数病猪在发病1~3天 出现中枢神经症状,表现过敏,后躯麻痹,呼吸困难,失明,眼球震颤,死前不久昏迷。病 程约10天,病死率高达100%。呕吐消耗病型也在出生后几天发病。最早的症状是恶心和呕吐,呕吐物有恶臭味。某些 病例 呕吐不明显,但不食,常发生便秘,喜喝水,继而咽喉肌麻痹,不能吞咽。病程数周。部分 病例可以康复。病理变化可分为中枢神经系统变化和呼吸道变化,但肉眼变化均不明显。某些脑 脊髓炎病例呈现轻度的卡他性鼻炎。某些呕吐消耗病病例,仅见胃肠炎变化。组织学检 查可看到非化脓性脑脊髓炎的病变。在呕吐消耗病病例,也有25%的脑组织呈现非化脓性 脑 脊髓炎变化。最严重的病变见于间脑、桥脑和延脑以及前部脊髓,而且几乎都限于灰质部分 。人工感染未吮初乳的仔猪,能规律地引起感染,潜伏期4~6天,病猪呈现与自然发病类 似的症状。
7.生态学病毒经口或鼻感染仔猪时,病毒可在扁桃体、喉、气管、肺、食管、胃和十二指 肠存在约48小时,在后脑内存在约72小时,在粪和直肠拭子内未能检出病毒。一般认为,病 毒的正常栖息场所是上呼吸道和脑桥、 延脑等组织。通 过排出的鼻分泌物传播本病。成年猪可发生非显性感染,并可排出病毒10天以上。本病毒不 发生子宫内感染。感染 母猪对乳猪提供乳汁抗体。确立感染以后,病毒在猪群中能存在多久,在自然排泄物中的稳 定性如何,均不清楚。
8.免疫尚无有效疫苗。在临产前2~3周,使母猪感染HEV,经数日后即可产生自动免疫, 仔猪可通过初乳获得保护。
9.诊断根据症状和流行情况只能作出推测性诊断。没有下痢症状,是与 传染性胃肠炎明显的不同之处。为了确诊,必须进行病毒分离或血清学试验。
(1)病毒分离和鉴定:无菌采取病猪的呼吸道分泌物、后脑或脊髓,按常规方法制成接 种材料,接种于胎猪肾原代细胞培养物。从接毒后12小时起,注意观察细胞培养物内有无融 合 细胞形成。48小时后,用鸡红细胞进行血凝试验和血细胞吸附试验,如为阳性,再进行血凝 抑制试验、血细胞吸附抑制试验或血清中和试验作进一步鉴定。也可用HEV荧光抗体染色 法检查细胞培养物,病毒抗原只见于胞浆内。荧光常见于靠近核的部位。感染细胞培养液先经3 000r/min离心沉淀,去除较大颗粒后,再用超速离心获得的沉淀物 作磷钨酸负染后电镜观察,可见典型的冠状病毒粒子。也可进行免疫电镜检查。
(2)血清学试验:猪感染病毒后,第7天可产生抗体,2~3周达最高效价。因此,从发病仔 猪的母猪或同窝存活的仔猪采取血清,进行血凝抑制试验、血细胞吸附抑制试验或血清中和 试验,常可达到诊断目的。
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