猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhae virus) 猪流行性腹泻是1种猪肠道传染性病毒病,本病以水样腹泻,呕吐和脱水为特征。本病于1976~1977年首先发现于比利时和英国的一些种猪场,在各种年龄的猪群中暴发了急 性腹泻。经查明其病原是1种不同于传染性胃肠炎病毒的类冠状病毒(Coronaviruslike,C VL),在形态上很难与其它冠状病毒相区别。此后,本病在欧洲 很多国家均有报道(比利时、英国、德国、捷克、匈牙利等)。我国近年来发生的所谓猪传染 性胃肠炎,经上海畜牧兽医研究所和长春农牧大学等单位的研究证实,有很多即为本病。
1.形态结构猪流行性腹泻病毒具有与冠状病毒科冠状病毒属其它成员同样的形态特征。在粪便病料中所 见的病毒粒子 是多形态的,大致呈球形。其平均直径(包括纤突)约130nm,范围为95~190nm。外有囊 膜,其上有花瓣状纤突。以电镜检查被感染的肠上皮细胞,在内质网池或胞浆空泡中可检出 病毒粒子,但在形态上无法与猪传染性胃肠炎病毒相区别。
2.理化学特性含有RNA,蛋白质。病毒的抵抗力不强,对乙醚、氯仿等敏感,一般消毒药都可将其杀灭。
3.抗原性经免疫荧光和免疫电镜试验证明,本病毒与IBV、猪血凝性脑脊髓炎病毒、新生犊牛腹泻病 毒、犬冠状病毒、猫传染性腹膜炎病毒没有抗原关系。与TGEV进行交叉中和试验,猪体 交叉保护试验、ELISA试验等,都证明二者在抗原性上不同,无共同抗原。
4.培养目前资料表明,本病毒人工细胞培养很难获得成功。如不作特殊处理,只能在猪 肠上皮细胞培养物内生长。长 春农牧大学1982年以吉林分离的毒株在胎猪肠组织原代单层细胞培养物中分离PEDV获得成功 ,并可适应猴肾传代细胞培养,在此基础上又建立了抗PEDV单克隆抗体杂交瘤细胞株。这在 国内外尚属首次。据报道,在无血清营养液中加入10μg/ml胰蛋白酶,可使本病毒适应传代 细胞如CV1、Vero细胞等。
5.病原性各种年龄的猪都能感染发病,哺乳仔猪、架子猪或育肥猪的发病率可达100%, 尤其哺乳仔猪受害最严重,母猪发病率为15%~90%。主要发生在冬季,夏季也可发生。我国 以12月~2月为本病高发季节。猪流行性腹泻病毒口服人工感染的潜伏期为1~2天,但自然发病的潜伏期可能较长。主要经 消化道传播,亦有经呼吸道传播的报道。哺乳仔猪受害最 严重,出现呕吐和水样腹泻。新生仔猪感染后常发生严重失水和死亡,病死率平均为50 %。断奶猪和育肥猪出现持续4~6天的水样腹泻,大多数病猪康复,但生长发育受影响 ,育肥后 期的体重出现减损。母猪发病以精神萎顿、厌食和持续约1周的下痢为特点。本病在4~5周 期间可传遍整个农场,但其传播常有自限性。病理变化仅限于小肠。肠管胀满扩张,充满黄色液体,肠壁变薄,肠系膜充血,肠 系膜淋巴结水肿。显微镜观察可见小肠绒毛缩短,绒毛与肠腺的比率从正常的7:1下降到 约3:1。
6.诊断本病的流行特点、临床症状和病理变化均与猪传染性胃肠炎十分相似,只是病死 率比 猪传染性胃肠炎稍低,在猪群中传播速度相对较为缓慢,且不同年龄的猪均易感染发病。但 这些差别只是程度上有所不同,很难根据上述表现确定诊断。本病的确诊主要依靠实验室检 查。
(1)病原分离和鉴定:仔猪人工感染试验是较常用的方法。最好选用2~3日龄 不喂初乳的仔猪,喂以消毒牛乳。将患病猪小肠组织及肠内容物做成悬液,加入青霉素 和链霉素各2 000U或mg/ml,在室温放置1小时,经口服接种仔猪。如试验仔猪发病,取其小 肠组织作直接免疫荧光染色检查。
(2)免疫荧光染色检查:试验研究证明,用直接免疫荧光技术检查病料中的猪流行性腹泻抗 原 是可靠的特异性诊断方法,应用最为广泛。取病猪小肠作冰冻切片或小肠粘膜抹片,风干后 丙酮固定,加荧光抗体染色,充分水洗,封盖镜检,1~2小时即可得出结果。根据对人工感 染 猪的试验观察,个别猪于感染后12小时即可由空肠检出少数荧光细胞;至18小时在小肠各段 可发现大量的荧光细胞,有的猪达30%~50%;出现腹泻后6小时,荧光细胞的数量达到 高峰, 空肠和回肠占90%~100%,十二指肠占70%~80%;至12~15小时,荧光细胞数显著减 少;但是到了后期(至96小时),荧光细胞数再次增多。为了与猪传染性胃肠炎鉴别,最好同 时用猪传染性胃肠炎荧光抗体染色检查。
(3)免疫电镜检查:可用已知的高免血清确定未知的病毒,也可用已知的猪流行性腹泻病毒 诊断 猪恢复期的血清。取经滤过的肠内容物,加等量经过稀释的高免血清,混合后在37℃感作 30分钟,再移至4℃感作18小时,然后将标本在4℃以31 000g离心60分钟,沉淀物以 少量蒸馏水悬浮后铺在铜网上,用2%磷钨酸负染后作电镜观察,如可疑病料中含有猪流行 性腹泻病毒粒子,由于抗原和抗体的特异性结合,病毒粒子呈晶格状排列,并可见到毒粒 间的抗体桥。
(4)酶联免疫吸附试验(ELISA):应用双抗体夹心法ELISA,检查病猪粪便中的病毒抗原,其 敏感性高于电镜检查,病猪一出现腹泻,即可采粪检查。若病猪已痊愈2周以上,可用间 接法ELISA检查血清中的抗体。据报道,猪感染后1~2周,即可测出抗体,3~5周后抗体滴 度达高峰,抗体持续时间最短为18周,最长可达22周以上。
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