摘要:以野生观赏植物薄皮木的带腋芽的茎段为外植体,建立组培快繁体系。结果表明:薄皮木组培的最适诱导培养基为MS 十6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L ,最适增殖培养基为MS +6-BA 5.0mg/L + NAAO.1 mg/L ,最适生根培养基为1 / 2 MS + IBA0.1mg / L.
关键词:薄皮木;组织培养;快速繁殖
薄皮木为茜草科野丁香属落叶小灌木,是一种野生观赏植物,可作为盆景材料或园林绿化树种。传统的繁殖方法是采用种子繁殖或扦插繁殖,但是,通过野外调查和试验观察,一直未发现及获得其成熟种子,而扦插繁殖生根较少,繁殖率低。该试验利用组培方法进行薄皮木的繁殖,建立薄皮木快繁体系,解决常规繁殖方法存在的不足,以适应商品化规模生产的需要。
1 材料与方法
1.1 材料
选取野外la 生带腋芽的幼嫩茎段。
1.2 方法
将带腋芽的幼嫩茎段,在流水中冲洗材料30 min, 用70 %乙醇浸泡30s ,再用0.1%氯化汞灭菌8 min,然后,用无菌水清洗6 次,每次3 min,最后切取0.5 一1cm带腋芽的茎段,接人培养基中。
1.3 培养条件
基本培养基为MS 培养基,琼脂7 % ,蔗糖30 % , pH 5.8 ,附加不同浓度配比的激素。培养室温度为24~ 26 ℃ ,光照时间14h ,光照强度2 000 lx.
2 结果与分析
2.1 诱导培养
以MS 培养基为基本培养基,附加不同浓度配比的6 - BA 和NAA, 30d 后统计薄皮木的诱导结果。
由表1 可见,以上5 种培养基上均能诱导出新芽,但出芽率有所差异,其中,4 号、5 号的诱导效果最好,接种数为30 ,其中有28 个茎段抽出新芽,出芽率最高,说明较高的浓度6-BA 更有利于新芽的诱导萌发。另外,培养基5 中的新芽长势优于其它培养基,因此,适合薄皮木带腋芽茎段诱导的培养基是MS 十6-BA 2.OMG/L + NAA 0.1 mg/L 。
2.2 增殖培养
以MS 培养基为基本培养基,附加不同浓度配比的6 - BA 和NAA (表2 、3 ) , 30d 后统计薄皮木的增殖情况。
2.2.1 6-BA 对薄皮木增殖的影响以NAA 的浓度为0.1 , 6-BA 的浓度不同,调查6-BA 对薄皮木增殖的影响。由表2 可见,1 号和2 号培养基中6-BA 浓度较低,增殖率也较低,因为接种的每一个茎段都含有2 个对生的腋芽,所以1 号和2 号培养基中薄皮木的增殖方式属于短枝增殖型,即由茎段的腋芽形成新的幼苗;随着6-BA 浓度的增加,增殖率也增加,当6 - BA 浓度为5.0mg/L 时,形成的丛生芽最多,增殖率最高,可达6.2 ,属于丛生芽增殖型;但6-BA 浓度达到6.0 mg/L 时,增值率反而会降低。因此,薄皮木增殖培养基中6-BA 最适合的浓度是5.0 mg/L.
2.2.2 NAA 对薄皮木增殖的影响以6-BA 的浓度为5.0 mg/L , NAA 的浓度不同,调查6-BA 对薄皮木增殖的影响(表3 )。由表3 可见,4 种培养基的增值率都较高,2 号培养基的增殖率最高,且长势良好,可达6.1 ,因此,薄皮木增殖培养基中NAA 最适合的浓度是0.1 mg / L 。由以上可知,对于薄皮木的增殖来说,6-BA 的作用至关重要,其影响要大于NAA ,但是,在NAA 不同浓度的处理中,NAA 为0.1 mg/L时,苗壮叶绿,长势最好,因此,综合考虑,薄皮木的最适增殖培养基为NAA十6-BA5.0 mg/L + NAAO.1 mg/L 。另外,试验表明,在薄皮木增殖次数过多时,丛生芽质量会有所下降,叶片变小,长势较弱,此时可降低6-BA 的浓度至2.0mg/L, 以达到壮苗的目的。
2.3 生根培养
以1 / 2MS 培养基为基本培养基,附加不同浓度的NAA 或IBA (表4 ) , 30d 后统计薄皮木组培苗的生根情况。由表4 可见,不同的激素对薄皮木生根的影响不同。在添加不同浓度的NAA 时,薄皮木组培苗的生根率均为O ;而添加IBA时,则表现为不同浓度的IBA生根率不同,IBA 浓度为0.1 mg/L 时,生根率可达100 % , 因此,薄皮木的最适生根培养基为1 / 2 MS + IBA 0.1mg/L 。
2.4 移栽及苗期管理
当薄皮木组培苗在生根培养基培养30d 后,生根数为6 一10 根,根长约2cm ,即可移栽。移栽前将棉塞去掉放置2d ,然后将苗小心取出,注意不要伤根,用清水将根上的琼脂洗净,转入蜓石或珍珠岩或蛙石与珍珠岩的混合基质中,盖塑料薄膜遮荫,温度控制在25 ℃ 左右,湿度在85 %左右,1 个月后即可移到苗圃进行常规管理。试验表明,移植到各种基质中的薄皮木组培苗的成活率均在96 %左右。
3 讨论
以薄皮木带腋芽茎段为外植体,对薄皮木的组织培养与快速繁殖进行了一系列试验,结果表明,薄皮木组培最适诱导培养基为MS 十6-BA2.0mg/L 十NAA 0.1mg/L ,最适增殖培养基为Ms 十6-BA 5.0mg/L 十NAA 0.1mg/L ,最适生根培养基为1 / 2 MS + IBA0.1mg/L , 薄皮木组培苗在蛙石和珍珠岩以及混合基质中均长势良好,成活率可达96%。薄皮木是一种小灌木,分支多,外植体取材有足够的数量,并且愈伤组织增殖型可能会发生变异,因此,以带腋芽茎段为外植体,通过丛生芽增殖是进行薄皮木的组织培养和快速繁殖的一条最佳途径。
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