病原性1954年，Fahey和Crawley首次从有慢性呼吸道疾病的鸡呼吸道内分离到禽呼肠孤 病毒，后来由Peter（１９６７）进一步证实。当时用这种被称为 Fahey Crawley 病毒，接种于易感鸡后，表现为温和性呼吸道疾病，病鸡的肝脏坏死并出现腱 和滑膜的炎症。禽呼肠孤病毒流行于鸡、火鸡、鸭、鹦鹉和其它禽类，可水平 传递亦可经卵垂直传递。已由多种疾病分离出该类病毒，包括病毒性关节炎、 腱鞘炎、矮小综合征（Stunting syndrome）、呼吸道病、肠病（Enteric disease）、吸收障碍综合征（Malabsorption syn drome ）和骨质疏松征（Osteoporosis）等。患禽生长受阻，发生心包炎、心肌炎、 心包积水、肠炎、肝炎，腔上囊和胸腺萎缩，骨短粗或出现急慢性呼吸道病。 某些呼肠孤病毒株的致病作用，由于柔嫩艾美尔球虫或巨型艾美尔球虫的协同 感染而加强。鸡感染传染性法氏囊病病毒或在特殊的饲养环境下，能增高由WVV2937 株感染所致腱鞘炎的严重性。呼肠孤病毒也能加剧由其它病原引起的疾病，如 鸡贫血因子、大肠埃希氏杆菌和新城疫病毒。由于感染了呼肠孤病毒，使机体 的免疫功能降低，导致对其它传染性病因的易感性增加。此外，在临床上未感 染的鸡也常发现病毒。由禽呼肠孤病毒所致的最重要和常见的疾病是病毒性关节炎、腱鞘炎和吸收障 碍综合征。病毒性关节炎、腱鞘炎: 发生于4～7周龄肉鸡，但也可能发生于14～16周龄。主要症状为跗关节上方胫骨和腱束双侧肿大，腱 移动受限，表现不同程度的跛行。继而出现腓肠肌腱破裂。1～7日龄雏鸡可能 见到肝炎、心肌炎。发病率可达100%，但死亡率低于2%。病鸡可能在1～3 周内由急性期恢复，但也可能变为慢性。病鸡的肉眼病变主要是两腿的炎性水 肿。 足 庶 骨骨干有时因骨膜的成骨性活动增 高而增大。跗关节和胫股关节内经常含有大量的柠檬黄色至棕色血染的液体，有时呈脓性。 组织学病变发生于滑膜、腱、关节和心脏。腱鞘明显水肿，滑膜细胞肥大和增生。滑膜内有 异染细胞、淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞的浸润，并有网状细胞集聚。在慢性病例，腱 鞘纤维化，肉芽组织包围或取代正常腱。心脏损伤包括心肌纤维之间发生异嗜细胞性浸润， 并伴有灶状的网状细胞增生区。吸收障碍综合征: 虽然从患有吸收障碍综合征的病鸡中经常分离到不同致病力 的呼肠孤病毒，但是病因关系并不清楚。1～3周龄雏鸡吸收障碍的症状包括色 素沉着不良、羽毛异常、骨质疏松、生长不匀、粪便中有未消化的饲料及腹泻 、死亡率增加等。目前，美国、欧洲和澳大利亚均有报道。最常见的报道是前 胃的膨大，伴有出血或坏死性病变、卡他性肠炎。此外，可能有因关节炎和骨 质疏松症而产生的跛行。组织学变化包括有伴发局灶性坏死的前胃炎、心肌炎 、法氏囊萎缩、卡他性肠炎和胰腺炎。股骨生长板有横向和纵向断裂以及软骨 坏死和骨质表面的破碎。常见淋巴细胞浸润的小肠绒毛萎缩。近年来，在欧洲发现一种新病，称之为“蓝翅病”(Blue wing disease, BWD)， 其特点为皮下及肌肉点状出血，胸腺、脾及法氏囊萎缩，对2%～3周龄的幼鸡致死 率可高达10%。从病鸡分离到两种致病病毒，一种为呼肠孤病毒，另一种为鸡传 染性贫血因子（CAA）。前者分离率最高的是病变的肌肉和皮肤，若单独接种易 感鸡，只有很低的致病性，但如将两者混合接种，则可成功地复制此病。

 

[BT4]5. 诊断 应结合临床症状再作病原学检查或血清学鉴定。

(1) 病原鉴定用无菌拭子采集胫股关节或胫跗关节的滑液或制备10%水肿滑液膜（腱膜）组织 悬液分离病毒，是较能确诊呼肠孤病毒感染的方法。还可由脾制备匀浆或从泄 殖腔、气管无菌棉拭子取样分离病毒。由于呼肠孤病毒感染的消化道和呼吸道 阶段时间短促，样品在使用前贮存在-20℃条件下。污染的病料需用抗生素处理 ，再经低速离心沉淀，除去较大颗粒后作接种用。鸡胚接种 优选的接种途径为5～7日龄鸡胚卵黄囊，每胚接种01～02ml可 疑病料。接种后3～5天鸡胚死亡，死胚明显出血，胚体微紫，内脏器官充、出 血。17～21天仍存活的胚略显矮小，肝、脾和心脏肿大并有坏死灶。也可接种 绒毛尿囊膜，形成痘样病斑和细胞浆包涵体，常于3～5天后死亡。尿囊腔途径 接种效果通常不好。细胞培养 2～6周龄鸡的肾原代细胞对于培养禽呼肠孤病毒优于鸡胚成纤维 细胞，亦可用鸡胚肝细胞，最好选用5%CO2的培养箱培养。由于呼肠孤病毒普遍存在于禽类的呼吸道和肠道，故从这些部位分离到呼肠孤 病毒，并不就是现症诊断的直接证据，如病毒性关节炎、腱鞘炎。诊断可通过 爪垫接种易感一日龄雏鸡，确定这些从受感染关节分离的呼肠孤病毒的相对致 病性，如果有致病性，在接种后72小时之内病毒可诱发爪垫出现明显炎症反应 。在分离病原的基础上，利用理化方法或血清学试验进一步对呼肠孤病毒分离物进 行鉴定。可采用DNA代谢抑制剂如在原代鸡肾细胞中用05μg/ml的放线菌素D、100 μg/ml 阿糖胞苷或300μg/ml 5氟2脱氧尿苷，病毒增殖不受影响，则说明为RNA 病毒。进一步用琼脂扩散和病毒中和等试验鉴定特异性病原。

[BT4](2) 血清学鉴定琼脂扩散试验 常用于检查呼肠孤病毒的群特异性抗体。抗原由磨碎未稀释 的感染绒毛尿囊膜（CAM）制备，这些CAM来自标准株卵黄囊途径接种死亡的胚 。也可应用感染鸡肾细胞培养物作为抗原。琼脂板用优质琼脂配制，琼脂含量 为12%，将其溶于001mol/L pH72的磷酸盐缓冲盐水中，内加8% NaCl和75%甘氨酸 。甘氨酸可使沉淀线更为清晰。孔径和孔间距均为3mm，中央1孔，周围6孔。将 抗原滴入于中央孔中，将待检血清滴加于周围孔内，并在第1和第4孔内滴加已 知的阳性血清，作为对照。在有关节病变的鸡体内，抗体可能长期持续存在， 但多数鸡的抗体可在4周内消失，故在普查鸡群的呼肠孤病毒感染时，应每月检 查一次。经脚掌人工感染的鸡，于接种后2～3周，血清中出现琼脂扩散抗体。 由于呼肠孤病毒在鸡群中传播迅速，因此只要检查鸡群中1%鸡的血清，即可了 解鸡群中是否有呼肠孤病毒感染的存在。中和试验 最好采用鸡肾细胞蚀斑减数试验，即在内含100个PFU（蚀斑单位 ）/01ml的病毒液中分别加入1∶10～1∶5 120不同稀释的等量待检血清，混合 后置37℃水浴中感作45分钟。另以1∶10稀释的阴性血清同样混合感作，作为对 照。吸取02ml，接种于60×15mm平皿中的鸡肾单层细胞上，任其吸附25小时 后加上7～8ml的覆盖琼脂。继续孵育5%～7天，再加内含0001%中性红的覆盖琼 脂5ml。8～12小时后计数蚀斑。与对照比较，以能抑制90％蚀斑的血清稀释度 的倒数为血清滴度。通常将效价为1∶40或以上视为阳性。由于需要应用不同血 清型的几个病毒株以及不同稀释度的待检血清，这一试验的工作量较大。荧光抗体试验 直接法检测感染组织内抗原，抗原可在感染细胞、滑液膜或 鸡肾细胞的胞浆内证实。若用间接荧光抗体，方法更敏感，更适用于进行定量 分析。ELISA试验 更适合于群体呼肠孤病毒抗体水平的分析，其结果与中和试验相 一致，Slaght等首次建立的ELISA方法检查禽呼肠孤病毒抗体，使用S1133毒株 作为抗原，发现它与Reo25和WVV2939株的抗体发生反应，但同源抗体滴度最高 。目前用于检测的ELISA系统已商品化。