黑穗醋栗组织培养和遗传转化三
录入时间:2009-7-1 15:10:09
来源：青岛海博
3 讨论转基因植株的获得依赖于合适的转化受体及转化细胞的有效再生。合适的转化受体首先要容易再生，要有高效稳定的再生能力。木本果树的再生能力往往不如草本植物，这是造成木本果树转化难度较大的主要因素之一。因此，在进行转化之前选择易于再生的外植体，建立有效的再生体系是十分必要的。多种外植体已经用于果树遗传转化的研究阵, 木本果树常用的转化受体为未成熟胚、子叶、体细胞胚、幼茎、愈伤组织、胚性悬浮细胞和茎尖分生组织等。在以细胞作为转基因受体时，由于细胞再生植株常受基因型限制，往往不能得到再生植株，从而使获得的转基因材料无法遗传下去。为解决这一问题，近年来有研究者提出了种质转化和非品种依赖型转基因技术体系的构建，即寻找将基因转人植物的种质系统中去的方法。通常采用的方法是茎尖转化（包括基因枪、农杆菌介导）、基因枪轰击花粉和种子法、种子浸泡法和子房注射法等。
目前，应用于果树遗传转化的方法主要有农杆菌介导法和DNA 直接导入法。本研究以黑穗醋栗茎尖分生组织为转化受体，利用农杆菌介导法进行基因转化的研究，获得了PCR 阳性株。茎尖再生体系是较为理想的基因转化受体系统。该系统存在的问题是，茎尖对卡那霉素的耐受性较强，故“逃逸”芽及嵌合体出现较多，因此，转化芽需经较长时间的继代筛选。本试验确定的茎尖分化卡那霉素筛选浓度为25 mg/L，该浓度已完全抑制了茎尖的分化。另外，本实验在茎尖分化、继代、生根等过程中都将进行卡那霉素筛选，尽量减少“逃逸”芽及嵌合体的出现。
4 结论
黑穗醋栗茎尖最佳分化和继代培养基为MS 十6-BA1.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L, 30 g/L蔗糖，0.8 % 琼脂，pH 5.8 。最佳丛生芽生根培养基为1 / 2MS , 30 g/L蔗糖，0.8 ％琼脂，pH5.8 。确定茎尖分化阶段卡那霉素的最适质量浓度为25 mg/L。丛生芽生根阶段卡那霉素最适质量浓度为20 mg/L。获得了抗卡那霉素的再生植株。提取转基因植株基因组DNA , 进行PCR 检测，结果表明osMAPK4 基因已经被整合到黑穗醋栗基因组中。
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