2 结果与分析
2.1 启动培养试验结果
植物激素是植物生命活动中不可缺少的物质,主要是促进细胞的分裂生长及诱导器官的分化。从表4 中可以看出,以第2 组效果最为良好(图1 ) ,所以芽段在MS 培养基中仅加人NAA 0.01mg/L ,就可以萌动产生新叶和新芽。当加人6 一BA 时,会导致愈伤组织的出现或芽生长细弱。从愈伤组织中萌生出小芽难以保证不发生变异,为了保持植株的优良性状,应尽量避免从愈伤组织中萌生出小芽,当NAA 浓度超过0.lmg/L 时,容易产生玻璃化。
2.2 增殖培养试验结果
从表5 中可以看出,第4 组,即l / 2 MS + 6 - BA lmg/L 十NAA 0.2mg/L 组合月增殖系数最大,达5.38 ,且芽生长最好(图2 )。K 代表每个因素试验结果的总和,如KI 代表每个因素第一水平试验结果的总和,从表5 中K 值大小可以看出,诱导分化培养基中各因素最优组合是A2B2C2 ,从R 值(代表每个因素3 个水平K 值的全距)大小可以看出,3 个因素对生根率影响的主次关系为:A -B 一C ,各处理的较优因子依次为:A2,B2 , C2 。同时对分化率的结果作方差分析,其中培养基对月增殖系数影响达到极显著(表6 ) 水平,F 值达8.37 ,其3 个水平中,以1 / 2MS 培养基为最佳。6 一BA 和NAA对月增殖系数影响不显著。
2.3 壮苗培养试验结果
雷公藤在增殖培养后芽苗为0.5 一1.0 cm ,芽苗虽多,但生长较为纤弱,诱导根质量较差,且在移植过程中由于芽苗较小,难以保证有较高的成活率,需要增加一个壮苗过程,将增殖培养过程得来的芽苗在壮苗培养基1 / 2 MS + NAA 0.lmg/L 中培养30d ,结果75 %的芽高达1.5 Cm 以上,茎段加粗,叶片大且厚。
2.4 生根培养试验结果
3 个月后,生根情况见表7 。以第5 组即1 / 2 Ms + ABT 一1 # 0.6mg/L 和IBA 0.3mg/L 组合的生根率最高,达80.8 % (图3 ) ,且通过对其他生根指标的观察,第5 组的生根情况在整个试验中也是相对较好的(图4 )。最差的是第9 组,即1 / 4 MS + ABT 一1 # 0.5 mg / L + IBA 0.2 mg / L ,生根率仅40.6 % ,其他生根指标也相对较差。由于生根率在生根培养中是最重要的指标。所以本研究对生根率的结果作正交统计分析。从K 值来看,生根培养基中各因素最优组合是A2B2C3 ,而此组合正好在正交试验表中出现,就是第5 组,即1 / 2 Ms + ABT 一1 # 0.6mg/L + IBA 0.3mg/L 。从R 值大小可以看出,3 个因素对生根率影响的主次关系为:A 一B 一C ,各处理的较优因子依次为:A2 , B2 , C3 。由于在组织培养中,并非生根越多越好,因为根数太多,在移植前对组培苗的清洗过程中,粘在根上的培养基难以清洗干净,容易滋生病菌,产生烂根的现象;同理,愈伤组织越小越好,越大也越容易出现烂根。从本试验可以看出,ABT 一1 #在0.8mg/L 水平时,愈伤组织面积最大。所以ABT 一1 #的水平应取0.8mg/L 以下。最早出现的生根时间是l9d (第3 组),这说明生根培养基的配方仍需调整,以提早生根的时间。
3 小结与讨论
雷公藤芽段在MS 培养基仅加人NAA0.01 Mg/L , 就可以萌动产生新叶和新芽,在雷公藤芽诱导培养阶段,主要依靠自身所贮藏的营养物质来促进其萌芽,而细胞生长素NAA 的少量加人,可促进其提早萌芽,但NAA 浓度过高时,反而引起玻璃化。在增殖培养中,以1 / 2 MS + 6 一BA lmg/L + NAA 0.2mg/L 组合月增殖系数最大,达5.38 ,且芽生长最好。但正交统计分析推断出最好的组合为,l / 2 MS + 6 一BA 2mg/L + NAA 0.2mg/L ,在后续的试验中将验证这点。同时,通过对雷公藤的数代增殖培养,在增殖前3 代内可适当提高细胞生长素与细胞分裂素的浓度,但在增殖3 代以后,也就是开始增殖培养的3 个月后,降低激素含量,新诱导的丛生芽才比较粗,质量相对较好。在增殖培养半年后,即使在不加激素的情况下,丛生芽中仍有新芽萌发,这说明激素在外植体中有逐渐累积的过程。
在生根培养中,以1 / 2 MS + ABT 一1 # 0.6mg/L + IBA 0.3mg/L 的生根率最高,达到80.8 %。生根率相对较低,而且所需要的时间也较长,所以在后续的试验中,要加强生根试验研究,提高生根率,缩短生根时间。
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