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细叶石斛原球茎组培褐化抑制与试管苗生根二



录入时间:2009-6-30 11:26:39 来源:青岛海博

2 结果与分析
2.1
不同的培养条件对原球茎揭化抑制的影响
本次实验通过在培养基中附加活性炭、维生素C 、聚乙烯毗咯烷酮(PVP ) ,把④ 号培养基的pH 值调为5.3 来代替附加酸性物质,使培养基达到弱酸条件。④ 编号中原球茎接种7d 后,开始变黄,而其他编号无明显现象。12d 后,② 、③ 、⑤ 编号的原球茎均出现轻度的褐化现象,④ 编号的原球茎虽然不发生褐化,但原球茎颜色已经由原来的黄色变为黄白色。17d 后,进行称量统计褐化率,实验结果见表1 。

从上述的实验结果可以看出,除了④ 编号培养基中的原球茎死亡之外,其他编号培养基中的原球茎都有一定的褐化现象,其中加活性炭的原球茎褐化程度最低,褐化率只有11.25 % ,与对照组的褐化率37.52 %相比有一定的抑制作用。而附加聚乙烯毗咯烷酮的原球茎褐化程度最大,褐化率达到80.02 % , 加速了原球茎的褐化。附加维生素C 的原球茎的褐化率为33.41 % ,介于附加活性炭和对照组之间,说明附加维生素C 有一定的抑制作用,但效果没有附加活性炭的好。调pH 5.3 的培养基的原球茎在培养了17d 后已经完全死亡,可能是由于培养基不凝,水分过多,抑制了原球茎呼吸从而导致死亡。从上述结果看,附加活性炭的原球茎生长最好,褐化率最低(见图1 ) ;加维生素C 的效果次之,加聚乙烯毗咯烷酮反而加速原球茎的褐化。
2.2
适宜的生根基本培养基筛选
接种完成后,每隔1 天进行一次实验观察,记录不同的基本培养基开始生根的时间及其他的现象。从表2 中可以看出,WPM 、大量元素减半的MS 、MS 、B5 基本培养基中的植株开始生根所需的时间相差不大,其中WPM 培养基的植株生根所需时间为19d ,是所需时间最少的,同时植株较壮,叶色浓绿,平均根数5.8 根/株,较粗壮(见图2 ) ;其次为大量元素减半的MS 培养基中的植株,所需时间为20d ,植株较壮,叶色绿,平均根数5.6 根/株;再次为MS 培养基中的植株,所需时间为22d ;表现较差的是B5 、N6 培养基。

2.3 生长调节剂的筛选
接种4Od 后,进行数据统计,本次试验以生根率为主要分析结果。进行直观分析和方差分析,结果见表3 。从表3 可直观看出,A 因素的2 水平、B 因素的2 水平和C 因素的l 水平对生根率的影响较大。由此可知细叶石斛的生根培养基的优良配方为MS + A2B2C1。因素的主次由极差的大小来衡量,极差大表明此因素对生根率的影响大,即此因素比较重要;极差小表明此因素对生根率影响小,即此因素是次要的。从表3 可知,主要因素为A ,其次为B ,再次为C 。方差分析结果表明,A 因素达到极显著水平(P=0.0001 < 0.01 ) ; B 因素达到显著水平(P=0.03 < 0.05 ) ; C 因素差异不显著(P0.195 > 0.05 )。这说明方差分析的结果与直观分析的结果一致。
在这一系列的培养基中的植株开始生根的时间大致相同,都在接种20 23d 左右,但是一旦开始生根,根伸长的速度很快。生根10d 后(即接种后30 - 33d )根长就达到3 cm 左右,到接种35d 后,根伸长的速度开始下降,接种后40d 时基本停止伸长。这时候苗的质量最好:苗粗壮、叶色浓绿、根吸收营养的能力强。培养时间超过50d ,培养基的营养几乎都耗尽,植株开始变黄,表现出营养不良的状况,培养基也开始变为褐色。所以如果要炼苗移栽,建议在接种后40d左右开始炼苗,效果会相对比较好。

3 结论
在培养基中添加活性炭对细叶石斛的原球茎褐化抑制的效果比较好,但是仍然不能完全抑制原球茎的褐化,怎么才能完全抑制细叶石斛原球茎增殖过程中的褐化现象,仍需要进一步的研究。实验结果表明WPM 培养基作为基本培养基比较适合细叶石斛的生根,所需时间最少,生根数量较多,植株粗壮,其次为大量元素减半的MS 培养基。正交实验初步表明生长调节剂中IBA 对细叶石斛试管苗生根的影响达到极显著水平,NAA 达到显著水平,而6 -BA 对细叶石斛的生根没有显著影响。该实验筛选出较好的生长调节剂组合及浓度水平,为细叶石斛的生产推广打下基础。

 

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