2.细胞代谢的测定细胞在代谢过程中形成各种 酸类，使营养液的pH下降，而病毒感染的细胞由于代谢障碍，产酸能力降低，且因细胞破 坏，释出碱性成分，营养液的pH下降不明显。根据这一原理，应用比色法测定感染培养物与 对照培养物的pH差异，从而间接推测细胞培养物中有无病毒增殖。但是必须指出，这种测定 只是“量”的差异,因此一定要细致准确。同时，无论是感染培养物，还是对照培养物，都 必 须多做几个样品，以免个别培养瓶中偶然因素所致的pH变化，引起错误判定。腺病毒感染 的细胞培养物是个例外，由于感染细胞的有丝分裂受阻，糖酵解增高，产酸量增加，因此感 染细胞培养物的pH经常低于未感染的对照细胞培养物。

〖BT4〗3.抗原的测定在病毒感 染的细胞 培养物中，通常都有特异性病毒抗原的出现。因此，应用相应的已知免疫血清测定细胞培养 物内的特异性抗原，是一个准确而特异的方法，不仅可以判定细胞培养物中有无病毒增殖 ，而且可以鉴定病毒的种类。测定病毒抗原，一般应用补体结合反应、沉淀反应(琼脂扩散 试验等)以及荧光抗体和酶标抗体检查法等，后两种方法还有确定病毒抗原在细胞内存在 部位，也就是抗原定位的功能。流感病毒、副流感病毒和细小病毒等含有血凝素，能够凝 集某些动物的红细胞。测定培养液中的血凝素，是判定这类病毒存在的常用方法。应用已知 的特异性免疫血清进行血凝抑制试验，更可进而鉴定病毒的种类和型。某些病毒感染，例如 某些副流感病毒和痘病毒，可在细胞培养物中呈现红细胞吸附现象。由于这种红细胞吸附现 象的出现早于细胞病变，因此可以用作早期判定。通常是将红细胞悬液加于细胞培养物中， 待其感作几分钟后，吸出红细胞悬液，并用洗液稍稍冲洗一下细胞培养物。随即置低倍显微 镜 下检查，可见感染细胞周围粘附有红细胞。这种红细胞吸附现象，也可被特异性免疫血清所 抑制。关于这些免疫血清学方法的详细机理和操作步骤，将在本章后面几节中介绍。本 书第三篇“病毒学各论”在叙述各该病毒的鉴定方法时也将介绍这方面的资料。

〖BT4〗 4.中和试验应用已知的免疫血清，分别与感染培养物混合，感作一定时间后， 用以接种敏感细胞。 随后检查各管细胞培养物的细胞病变、血凝素或红细胞吸附能力。能被某一已知免疫血清特 异地抑制的感染培养物，就是存在着相应病毒的证明。对未知病毒的鉴定，需要使用 多种不同种类的抗血清进行试验，但根据待鉴定病毒可生长增殖的细胞种类、细胞病变 类型、疾病的流行情况和症状等等，适当缩小试验范围，选 择最为可能的相应抗血清进行鉴定。一般是用200 TCID50的病毒液(见下节)和抗血清 等量混合，充分振荡混合后，置37℃放置一小时。对特别不耐热的病毒，可置4℃冰箱内 进行感作，随后接种细胞。通常应用4单位的抗血清(例 如将效价为1:1024的抗血清，作成256倍稀释，即为4单位抗血清)，但对某些病毒， 可能要用高得多的抗血清(例如20～200单位的抗血清)才能呈现中和效应。因此最好将抗血 清作成4～200个单位的几个稀释度进行试验，同时设置病毒、血清对照，以便排除抗血清对 细胞的毒性以及病毒本身不产生细胞病变等意外现象。每天检查一次。当病毒对照管内的细 胞层完全变性脱落，而在加血清的试管中细胞不出现病变，继续保持正常形态时，即 可认为引起细胞病变的病毒与所用抗血清是相应的。例如使用的是乙型脑炎抗血清，则即 可初步判定该病毒为乙型脑炎病毒或其近似的同属成员。关于中和试验的原理和详细方法将 在本章下一节介绍。

〖BT4〗5.病毒间的干扰现象两种不同种类的病毒同时接种于一个培养容器时，其中一种病毒的增殖对另一种病毒的增殖 呈现明显的抑制作用，这种现象即病毒间的干扰现象。例如流感病毒能够干扰西方型马脑炎 病毒的增 殖，而乙型脑炎病毒则可干扰脊髓灰质炎病毒等。故在某一细胞培养物中同时加入接种物 以及可被干扰的病毒，如果后者的增殖受到抑制，则就可以间接判定接种物中存在一种可以 干扰后者的病毒。这一方法主要用于不产生细胞病变以及没有血凝和红细胞吸附特性的 病毒的鉴定。现以猪传染性胃肠炎病毒干扰牛病毒腹泻粘膜病病毒为例，说明有关方法 ：先将疑似猪传染性胃肠炎感染的病料同步接种于猪肾细胞，24小时后，接种100个TCID ５０的病毒性腹泻粘膜病病毒，同时设病料组、牛病毒性腹泻粘膜病病毒组、正常 细胞组对照，72～96小时后观察，正常细胞没有病变，病料牛病毒性腹泻粘膜 病病毒组有病变，病料组细胞没有病变，说明实验条件成立，可进行判定。若接种病料的细 胞再经接种牛病毒性腹泻粘膜病病毒产生细胞病变，则表明此病料中没有猪传染性胃肠炎 病毒在细胞上生长。若未产生细胞病变，则表明病料中含有猪传染性胃肠炎病毒，且已 在细胞上生长。干扰试验阳性。 。

〖BT4〗6.电子显微镜观察在电镜日益普及的今天，取感染培养物作成电镜标本后染 色检查，是一个比较快速可靠的方法。电镜不仅可以看到病毒粒子的存在，而且可以根据病 毒粒子的形态及其在细胞内的位置，而大致判定其属于哪一个病毒科(属)。我们在 病毒培养和病毒鉴定工作中经常应用电镜手段，特别是对某些具有特征性形 态结构和排列方式的病毒，都取得了良好的效果。有关电子显微镜技术的原理和方法，请参 阅本书第十二章。