摘要：以金正日球根海棠的叶片为外植体进行组织培养的诱导，以Ms培养基为基本培养基，并附加不同浓度的细胞分裂素6 一BA 以及生长素NAA 或2 , 4 一D 进行组织培养和植株再生。经实验筛选出最适合诱导愈伤组织的培养基是MS + 6 一BA1.0一2.0 + NAAO.1 一0.5 ；脱分化的最佳激素组合是培养基MS + 6-BA1.0 + NAAO.5 。
关键词：球根海棠；组织培养；诱导
球根海棠以其花大、色艳而被誉为观花类秋海棠之王，金正日是从球根海棠中选育出的红色大花品种。球根海棠是多年生球根花卉，品种繁多，硕大鲜艳的花朵形似茶花或牡丹，美丽诱人，观赏价值极高。球根海棠多年生草本，地下具有肉质扁圆形的块茎，为园艺杂交品种，株高30 ~60 cm 。茎直立，肉质，绿色或暗红色，被毛。单叶互生，叶片斜卵形，先端锐尖，叶缘有齿牙。花顶生，重瓣，紫红色、黄色或粉色等，其花大如茶花，直径可达20 cm ，花期9 月至翌年5 月。喜温暖湿润的生活环境，夏季凉爽的气候，在富含腐殖质，排水良好的微酸沙质壤土上生长较好。球根海棠兼有月季、牡丹、茶花等名贵花种的色、香、姿、韵，是珍贵的观赏花卉，经济价值较高。球根海棠的传统繁殖方法是种子繁殖、扦插、嫁接、分株等方法，繁殖系数低、苗木质量差、繁殖周期长、品种推广慢，且受季节和自然发育的限制，严重阻碍了花卉业在我国的迅速发展。近年来，植物组织培养应用于植物的离体快速繁殖，是目前应用最多、最广泛和最有成效的一种技术。利用组织培养便可以提高苗木质量，使品种纯化、优化，加快繁殖速度，提高经济效益。组织培养是国内外最先进的无性繁殖方法，可以在短期内进行大量繁殖，迅速形成生产规模，以满足不断增长的广大鲜花消费者及市场的需求。
1 材料与方法
1.1 实验材料
供试材料为球根海棠金正日的幼嫩叶片。
1.2 实验方法
1.2.1 外植体的获得与灭菌金正日的组织培养以嫩叶作为外植体。在取材前15d 左右，把母株置于温室内，要防止往叶片上喷水。在接种前选择健壮无病的叶片剪下，放入广口瓶，加少量洗衣粉，然后用自来水冲洗20 一60 min 。在无菌室内用73 ％的乙醇灭菌3 一5s ，用无菌水冲洗一次，接着用0.1 ％的氯化汞溶液浸泡5 一7min （浸泡过程要轻轻摇几次），再用无菌水冲洗4 一6 次，将灭过菌的叶片放在无菌纸上，剪成1cm2左右的小块。接种到预制的已灭过菌的MS 培养基上，每个试管只接种一个外植体。
1.2.2 培养基及培养条件基本培养基为MS ，蔗糖3%，琼脂 0.7 5%， p H 5.8 。并添加有不同种类和浓度的植物生长调节剂。培养温度为( 2 5 ±1 ) ℃， 光照强度
1 5 0 0 ~20 0 0l x ， 每 日光照 1 2h。
1.3 球根海棠愈伤组织诱导和分化的研究
1.3.1 激素组合对愈伤组织形成的影响将配制好的 8种初始培养基分装在三角瓶中， 再将经过灭菌后接种在基本培养基中培养 1 0 d ， 无污染的叶片随机分成 8组， 每组 3 O块， 分别转接于 8种含有不同激素组合的初始培养基中进行初代培养，培养室的温度控制在2 0 ~2 2 ℃， 光照强度在 1 5 0 0 l x ， 每天光照 1 2 h 。每天观察球根海棠叶片的变化， 观察、 记录不同培养基中愈伤组织的发生时间、生长速度、 发生数量及产生的愈伤组织的颜色等， 2 0d后分别统计在不同培养基中愈伤组织发生的块数。
1.3.2 不同培养基的不定芽分化比较 将配制好的 8种初始培养基分装在三角瓶中， 再将在基本培养基中培养 1 0d后无污染的叶片随机分组， 每组 3 O块， 分别转接于 8 种含有不同激素组合的初始培养基中进行初代培养， 培养室的温度控制在 20 ～2 2 ℃， 光照强度在 15 0 0 l x ， 每天光照 1 2h ， 3 0d后转接一次， 直到 8种培养基中都有不定芽的分化， 观察、 记录不同基因型在不同激素组合下愈伤组织的增殖速度和数量及再分化开始时间、 分化的速度、芽点的颜色、 密集程度等， 统计在不同培养基中再生植株的多少。观察愈伤组织与不定芽发生的关系。
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