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电泳法-病毒提纯方法



录入时间:2009-6-26 9:29:52 来源:青岛海博

 
先将病毒悬液对缓冲液透析。根据病毒的种类不同,选择适当的缓冲液,但离子强度不能超过03mol/L以上。病毒粒子依据其所携带的电荷,在电场中或向正极,或向负极移动,因此电泳结束后,分段收集病毒区带部分,就能达到提纯的目的。  Polson设计了特殊的U形电泳管,进行了脊髓灰质炎病毒的大量精制。本法包括密度梯度电泳和pH梯度电泳等,后者又称为等电聚焦电泳。[HT5”SS][JZ]图13-1〓Polson]U形电泳管[JZ]A,B电极槽;C电泳管;D侧管;E毛细漏斗;FU形侧管;G节门活塞]。[HT5SS]  图中C为梯度柱即电泳管,容积为110~220ml,外面为冷凝套管,必]要时可用流水冷却。梯度溶液经常用0~40%蔗糖作为梯度介质。A和B为电极槽,D为侧管,E]为毛细漏斗,F为U形管另一侧,装入缓冲液,G为节门活塞。  从毛细管E小心注入缓冲液配制的蔗糖浓度梯度溶液(此时活塞G开放),密度低者在上,密度高者在下。于两侧电极槽中只加入缓冲液。然后将浓缩的病毒样品悬浮于40%蔗糖溶液中,或向病毒悬液中加入固体蔗糖,使样品中最终含蔗糖浓度约为37%,并在样品中加入适量酚红作指示剂。此后用注射器通过胶管从毛细管E注入2ml样品,于注入口附近形成样品带。加完样品后通电,依据病毒粒子所携带的电荷而在电泳管内移动。电泳完毕后由侧管D分段取样,测定各管中蛋白含量和病毒滴度或抗1*ヒ话愕牡缬痉ê苌儆糜诖罅恐票福蛭缬竞芤资共《镜鞍酌鸹睿梅椒ㄖ饕τ糜诓《镜鞍椎姆治鲇爰āSτ米疃嗟氖荢DS聚丙烯酰胺凝胶电泳法。7泳法。

 

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