常用试剂及其使用方法
一、诊断用纸片
⑴ 杆菌肽纸片(0.04U/片): 抑菌圈>10mm为敏感。质控菌株: D群链球菌阴性, A群链球菌阳性。
⑵ SMZ纸片(1.25μg/片、23.75μg/片): 出现抑菌圈即为敏感。质控菌株:D群链球菌阳性, A群链球菌阴性。
⑶ 新生霉素纸片(5.0μg/片): 抑菌圈≥16mm为敏感。质控菌株:表皮葡萄球菌阳性,腐生葡萄球菌阴性。
⑷ O129纸片、奥普托欣(Optochin)纸片:参见《生化试验培养基》。
二、诊断用血清
1.沙门菌属诊断血清
⑴ A-F群O多价诊断血清。
⑵ 特异O群因子诊断血清:常用的有O2,O4,O7,O9,O10诊断血清。
⑶ 特异H因子诊断血清 常用的有Ha,Hb,Hc,Hd,Hgm,Hi,Hf、Vi因子诊断血清。
2.志贺菌属诊断血清
志贺菌属4种多价血清:痢疾志贺菌Ⅰ、Ⅱ血清,福氏志贺菌多价血清及分型血清(1~6型),宋内志贺菌诊断血清,鲍氏志贺菌多价血清及分型血清。
3.致病性大肠埃希菌诊断血清
肠致病性大肠埃希菌(EPEC)诊断血清,产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)诊断血清,肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)诊断血清,肠出血性大肠埃希菌(EHEC)诊断血清O157: H 7。
4.霍乱弧菌O1、O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清
5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清
6.链球菌分类诊断血清
7.肺炎链球菌诊断血清
8.耶尔森菌诊断血清
三、常用染色液
1.革兰染色液
⑴ 结晶紫溶液 A液:结晶紫 20g,95%乙醇20 ml; B液:草酸铵 0.8g, 蒸馏水80 ml。
染色前24h将A液、 B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。
⑵ 碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。
将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升蒸馏水, 使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。
⑶ 脱色液:95%乙醇
⑷ 复染液:沙黄2.5g,95%乙醇100ml为贮存液,取贮存液10ml,加蒸馏水90ml为应用液。
2.抗酸染色液
⑴ 碱性复红染色液: ①萋纳石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱和溶液10ml,5%石炭酸溶液90ml。 ②脱色液:浓盐酸3ml,95%乙醇97ml。③复染液(吕弗勒美蓝液):美蓝乙醇饱和溶液30ml,100g/L氢氧化钾溶液0.1ml,蒸馏水100ml。
⑵ 金胺O-罗丹明B染色液: ①罗丹明B液:罗丹明B 0.1g加蒸馏水100ml。②1g/L金胺O液:金胺O液0.1g加蒸馏水95ml,再加入纯石炭酸 5ml,混匀。③3%盐酸乙醇。④稀释美蓝液:吕弗勒美蓝液100ml,加蒸馏水90ml,混匀。
3.鞭毛染色液(改良Ryu法)
A液:5%石炭酸10ml,鞣酸2g,饱和硫酸铝钾溶液 10ml; B液:结晶紫乙醇饱和液。应用液A液10份,B液1份,混合,室温存放备用。
4.异染颗粒染色液
甲液:甲苯胺蓝 0.15g,孔雀绿 2g/L, 95% 乙醇2.0ml,蒸馏水100ml。乙液:碘 2g,碘化钾3g,蒸馏水300ml。
先将碘化钾加入少许蒸馏水(约2ml),充分振摇,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解后, 加蒸馏水至300ml。
5.荚膜染色液
⑴ 印度墨汁或50g/L黑色素水溶液
⑵ 5g/L苯胺蓝水溶液
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