2.结果与分析
基本培养基对腋芽萌发的影响
外植体Ⅳ置于如表2 所示的培养基上培养,腋芽都能萌发生长,2 种外植体芽的平均萌动率大小及萌动时间的早晚顺序是E4 、E2、E3 、El 。在E4 培养基上的外植体节间较长,展叶最快,小苗健壮;E2 、E3 培养基诱导的小苗茎段粗壮,节间短,叶片较厚;在El 培养基上诱导的小苗节间短,生长较缓慢,基部生长无叶柄的叶片较多。
2.2 不同激素组合对腋芽萌动及生长的影响
以2008 年5 月的外植体Ⅳ 接种在表3 所示的培养基上培养,腋芽萌动快慢和萌动率大小最佳是E4 、E8 培养基。
2.3 不同叶位的外植体芽萌发生长的差异性
外植体I 、Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ 、V 分别置于E4 培养基上培养(表4 )。5 种外植体褐化率大小顺序是I 、Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ 、V ,外植体Ⅲ 萌动最快,外植体I 萌动最晚。外植体Ⅲ 、Ⅳ 萌动天数短,萌动率较高。
2.4 不同季节材料腋芽萌动的差异性将2008 年5 、8 、10 月取材的外植体Ⅳ 分别置于E4 培养基上培养,从表5 可看出,外植体萌动率及萌动快慢均为5 月>8 月>10 月,但污染率8 月份最高,其次是5 月、10 月。
2.5 不同培养基对试管苗增殖的影响
将试管苗外植体Ml 、MZ 、M3 分别接至E12 、E13 、E14 培养基上培养(表6 ) , 40d 后外植体MI 都未诱导出愈伤组织。在E12 、E13 培养基上培养的外植体MZ ,其茎段基部都形成了愈伤组织,培养20d 左右,外植体上的腋芽都处于萌动状态,随后生长旺盛;而在E14 培养基上培养的外植体未诱导出愈伤组织,腋芽萌动比E12 、E13 慢。在E12 、E13 培养基上培养的外植体M3 ,其茎段切口处都形成愈伤组织,顶芽生长,但顶芽下的腋芽未见萌发生长;在E15 培养基上的外植体未能诱导出愈伤组织,顶芽虽能生长,但长势弱。
2.6 小苗生根培养对移栽成活的影响
试管苗置于E15 培养基上培养10 一15d 后,移栽于蛙石中,在25 一30 ℃ 气温条件下半月左右即可发根,然后栽植土壤中,基本可以成活。
3 讨论
在B5 、MS 、MT 和改良White 4 种培养基的对比试验中,MT 培养基培养的外植体,腋芽萌发率最高,萌发速度最快,可能是MT 培养基的的无机成分、维生素等的组合较适合冬青苦丁茶生长。
在许多植物组织培养中,外植体本身的生理状况、休眠深度与植株再生相关。研究发现,5 月份取材的外植体腋芽萌动最快,萌动率最高;10 月份取材的外植体腋芽萌动最慢,萌动率最低;8 月份取材的外植体的腋芽萌动时间、萌动率介于5 月和10 月份之间,但污染率高。苦丁茶树系高大乔木,有很强的顶端优势。外植体随着木质化程度的增加,褐变率降低,萌动时间缩短,萌动率提高,但已形成驻芽的外植体芽萌动时间延长。研究中以顶芽下4 一6 叶位的外植体萌动时间最短,萌动率最高,这可能与苦丁茶树生长特性有关。因此笔者认为,苦丁冬青的茎段培养宜在春季取半木质化的材料作为外植体培养。
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