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东方百合茎尖组培技术研究



录入时间:2009-6-24 9:58:45 来源:青岛海博

摘要【目的〕 研究东方百合索蚌、元帅、西伯利亚茎尖分生组织分化,生产脱毒种苗。【 方法】 利用MS 培养基和外源激素,对东方百合品种进行茎尖组织培养。【结果】鲜片诱导小仔球的最适培养基为Ms 6 - BA 1.0mg/L NAA 0.2mg/L 。茎尖诱导和分化的最适培养基为MS + 6 – BA1.0mg/L + NAA 0.5mg/L 。[结论〕 在百合种球产业化生产中,该方法是获得百合复壮原种的主要手段。
关键词:东方百合;鳞茎;茎尖培养;MS 培养基
东方百合在我国不少地方被引种栽培,在切花与盆花繁殖中,主要利用无性繁殖产生种球。由于长期使用营养体繁殖,东方百合的病毒感染程度很高,因而经常发生种球退化现象,严重影响了切花与盆花质量。目前,利用百合鳞片、胚等不同外植体进行组培分化出的试管苗,可以提高百合的繁殖系数,达到扩繁的目的。除了诱导不定芽外,还有诱导小鳞茎的报道叫。百合组培脱毒常用的外植体是百合茎尖,多数利用鳞片不定芽的茎尖作繁殖材料。1 个百合茎尖经初代培养可以分化出6 10 个不定芽。再经继代培养,每个芽加d 左右又可分化出9 10 个小芽。该方法在百合种球产业化生产中可以用于种球复壮,是获得复壮原种的主要手段。赵庆芳等对东方百合组培快繁技术进行了研究,但未涉及茎尖培养脱毒。笔者研究了东方百合茎尖的组培技术,旨在为规模化生产东方百合脱毒苗提供参考。
1
材料与方法
1.1
供试材料从江苏省球根花卉种质资源基因库(苏州农业职业技术学院园艺中心球根花卉种植圃)采集健壮的东方百合品种索蚌、元帅、西伯利亚植株的种球。
1.2
方法
1.2.1
鳞片消毒和接种。先剥掉种球外部已坏死或病菌感染严重的鳞片,然后取种球外面几层鳞片,用洗衣粉加水搅动洗涤10 min ,流水条件下冲洗2h ,晾干后放置备用。将清洗好的鳞片置于75 %的酒精溶液中消毒0.5 min ,用无菌水冲洗1 次,再用0.1 %升汞溶液消毒10 min ,无菌水冲洗5 次,用灭菌滤纸吸干水分。将消毒鳞片切成5mm2 大小,凸面朝上插人培养基,每个培养瓶接种1 个外植体,每种培养基接种50 份,进行初代培养。
1.2.2
不同激素组合对不同百合品种鳞片诱导小仔球形成的影响。设计的接种用MS 培养基及激素组合。培养基PH值为5.6 5.8 ,蔗糖浓度为30g/ L ,培养温度(25 2 )℃ ,光照强度1500~2000lx ,每天照光16h 。培养一段时间后,定期观察接种到上述不同种类培养基上的鳞片分化仔球的情况,记录仔球分化数和直径,确定最适培养基用于茎尖诱导小仔球的继代培养。
1.2.3
不同激素组合对不同大小的茎尖分生组织诱导分化的影响。取经过初代培养的小仔球,在解剖镜下切取长度为0.2mm以下、0.2 0.5mm0.5 mm以上的3 种茎尖进行培养。根据上述鳞片分化仔球的试验结果,设计茎尖接种的培养基及激素组合培养基声值为5.6 5.8 ,蔗糖浓度30g/L ,培养温度(25 2 )℃ ,光照强度15002000lx ,每天照光16h 。培养一段时间后,定期观察茎尖分生组织诱导分化的情况,记录生长点死亡数、形成明显愈伤组织的茎尖数、不定芽产生的茎尖数、平均每茎尖产生的不定芽数。
2
结果与分析
2.1
不同激素组合对不同百合品种鳞片诱导小仔球的影响3 个品种外植体块分别接种到4 种培养基上培养46d 后,观察统计不同培养基对仔球再分化的影响。由表1 可知:在② 号培养基中,索蚌仔球的每鳞片仔球分化平均数最高,仔球的平均直径虽相对较小,但适合提高仔球的繁殖系数;在① 号培养基中,仔球的每鳞片仔球分化平均数最低,有85 % 的鳞片形成明显的愈伤组织,说明有利于愈伤组织的诱导;在④ 号培养基中,形成的小仔球较大,但数量少;③ 号培养基中的小仔球数量和大小介于培养基② 和④ 之间,为诱导小仔球最适培养基。由表1 还可知,③ 号培养基诱导元帅小仔球的效果同诱导索蚌情况类似,为最适培养基,② 和③ 号差别球的效果最好。经比较可知,3 个品种分化程度差别不大,索较小,④ 和① 号不利于繁殖;② 号培养基诱导西伯利亚小仔蚌分化最好,西伯利亚分化最差。
3
小结与讨论
索蚌和元帅分化鳞片诱导小仔球的最适培养基为MS + 6 BA10mg/L + NAAO.2mg/L ,西伯利亚为Ms 6 - BA2.0mg/lNAA 0.2mg/L ;茎尖诱导和分化的最适培养基都为MS+ 6 BA 1.0mg/L + NAA0.5mg/L。
大量文献指出,一定范围内茎尖越小,诱导的愈伤组织及不定芽数量越少,但脱毒质量越高。该试验利用鳞片和0.5mm以下的茎尖对东方百合进行离体培养,通过脱分化产生愈伤组织,或直接产生不定芽,建立了无性繁殖系。试验
中,先用鳞片诱导分化一定量的无菌不定芽,然后再利用无菌不定芽剥取茎尖,比直接用带菌鳞茎剥取茎尖降低了污染率,提高了成活率且节省了材料,但脱毒效果需进一步研究。

 

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