组织培养,原来是指动物或植物组织小块的体外培 养。这个名称现在用以泛指体外的组织、器官和细胞培养,是分离和培养病毒以及进行病毒 学实验研究的简便而有效的工具和手段。病毒在细胞内的增殖及其对细胞的作用,可以根据 细胞病变、细胞培养物内出现血凝素或其他病毒抗原、红细胞吸附现象以及通过对“指示病 毒”的干扰等方法加以识别。近年来,许多新的动物病毒,就是通过组织培养方法而被发现。 生产病毒抗原以及制造病毒疫苗,则更大量地应用着组织培养。组织培养的方法有三种。
1．组织(块)培养这就是原来意义上的所谓组织培养。将动物组织切成小 块在固定或悬浮状态下培养。组织块培养是最早的组织培养方法。
2．器官培养 取器官薄片(例如一段胎儿气管或一小块鼻粘膜)进行培养,使其基本保持原来的结 构和功能,例如正常的纤毛上皮运动。某些呼吸道病毒,就是应用器官培养才分离出来的。这 种培养还是研究器官生理机能以及某些病毒感染机理的良好工具。
3.细胞培养应用胰酶等分散剂将动物组织消化成单个细胞悬液,适当洗涤以后,加入营养液,通常 即可使其贴附于玻璃瓶壁上, 并生长增殖。这样的细胞培养物称作〖ZZ4〗原代细胞。将已 长成单层的原代细胞从玻璃瓶壁上消化下来后再作培养,就是〖ZZ4〗继代细胞。原代细胞和 继代细胞一般地还保持原来细胞主要特性,例如继续保持正常体细胞二倍体组型的染色体等 。经过严格检查,染色体的数目和形态正常,并且没有污染的继代细胞,特称〖ZZ6〗二倍体细 胞株。继代细胞(包括二倍体细胞株)一般可在体外传几代、几十代至一百代左右,此后不可 避免地逐渐衰老死亡。由于遗传突变或者在理化学物质和致瘤病毒的作用下,组织培养细 胞中有时出现恶性变细胞,也就是癌变细胞。这种癌变细胞具有很高的生长和增殖势能,而且 几乎可以无限地传代,故称〖ZZ5〗传代细胞系。传代细胞系的染色体已经发生改变,不再保 持原来细胞的正规的二倍体组型,故又称为异倍体细胞。由人体和动物体取得肿瘤组织进行 培养,比较容易获得传代细胞系。为使二倍体细胞株不致因定期传代而不断增加代数,同时 也是为了避免发生变异,通常将其保存于-196℃的液体氮中,以甘油或二甲基亚砜作为保存剂 。这样保存的细胞株,可以随时取用, 甚为方便。但是必须指出,即使在已经鉴定并已广泛 应用的细胞系(株)中也常可能发生病毒污染,例如作者等在进口的IB〖ＤＫ〗RS〖DK〗2 系猪 肾细胞中就曾发现有一种RNA病毒的污染。
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