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组织培养的条件



录入时间:2009-6-12 9:40:20 来源:百度

                               组织培养的条件 
 
1、实验室
    在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解,以便因地制宜地利用现有房屋,或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时,应按组织培养程序来没计,避免某些环节倒排,引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件,需要一定的设备、器材和用具,同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
    (1)实验室设计原则:保证无菌操作,达到工作方便,防止污染。
     (2)实验室组成:化学实验室、洗涤菌室、无菌操作室(接种室)、培养室、细胞学实验室。化学实验室(准备室):完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备:药品柜、防尘橱(放置培养容器)、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器.
    洗涤、灭菌室:完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。主要设备:水池、操作台、高压灭菌锅、干燥灭菌器(如烘箱)等。
    无菌操作室(接种室):主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。无菌室的建造要求严格,接种室宜小不宜大,一般7~8平米,要求接种室干爽安静,清洁明亮,除出入口和通气口外,应当密闭,配置拉动门,以减少开关门时的空气扰动,用紫外光灯灭菌后,能较长时间保持无菌状态。为避免消毒药品的腐蚀,地板、内墙和作业台应采用耐水、耐药的材料,如经过油漆,铺上瓷砖或玻璃,或采用磨光水泥等,通气口要安装排风扇,定期开机更换空气。无菌室设内外二间,外间小些,为缓冲室,供工作人员换衣、帽、鞋、口罩之用。备有衣帽钩和拖鞋架。内间较大,接种用,备有工作台,放物台,小型离心机,真空抽气机等。内外间分别安装紫外灯,操作前至少开灯20分钟。室内定期用甲醛和高锰酸钾熏蒸。
    主要设备:紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械(接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针)等。
    培养室:培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。室内要求内壁保温和油漆,具有磨光水泥的或油漆过的地板,顶高以2.6m为宜,易于控制温湿度,窗户上要装双层密封玻璃窗。有窗户虽对保温保湿不利,但有自然光射入,对苗的生长和无菌有好处。室内要有足够的电源。室内要保持清洁,定期用20%新洁尔灭消毒,防止杂菌生长。
    由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度,最好不同种类有不同的培养室。培养架可分4-5层,上面安装30-40W日光灯照明,每天照明10-16小时左右,用自动定时器控制。温度最好保持在15-25℃左右。此外还可根据需要安置液体培养所需的摇床、转床等。室内湿度也要求恒定,相对湿度以保持在70%~80%为好,可安装加湿器。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源,这样不但可以节省能源,而且组培苗接受太阳光生长良好,驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。
    设备主要应有:空调机,供升降温用;加热器,供加热用;温度控制器,供恒温用;定时器,供控制光照时间用;培养架,供放置培养瓶用,培养架的框子用木制或三角铁制皆可,应漆成白色或银灰色,每层隔板可用玻璃或木料制成,但光照效果要好;日光灯供光照之用。
2、常用药品组织培养所需药品主要用于培养基的配制,也有部分用于消毒,主要有以下几类: 
    (一)消毒药品
    主要有次氯酸钠、次氯酸钙、双氧水、漂白精片、溴水、硝酸银等。
    (二)无机盐类(inorganic element)包括大量元素和微量元素两类,主要的盐类有KNO3、MgSO4·7H2O、NH4NO3、KH2PO4、CaCl2·2H2O、Fe2(SO4)3、Na2HPO4、CuSO4、NaNO3、Na2SO4、ZnSO4、MnSO4·4H2O、MnCl2·2H20、KI、H3BO3等,无机盐是供外植体吸收的基本营养成分,各有不同作用,如N、P影响蛋白质的合成,Ca、K、S、Mg影响酶活性等。 
    (三)有机化合物(organic compound)
    主要有蔗糖、维生素类(vitamin)肌醇(myo—inosltol)、氨基酸(almino acide)等。其中蔗糖是不可缺少的碳源,也是渗透压调节物质。维生素的主要作用是促进细胞分裂和诱导器官分化。氨基酸是蛋白质组成成分,也是有机氮源。
    (四)植物生长调节剂(hormone)
    用于组织培养的主要有生长素、细胞分裂素及赤霉素三大类: 
    ⒈生长素类(auxin) 主要有吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2,4-D和吲哚丁酸(IBA)。2,4-D有利愈伤组织生长,NAA、IAA、IBA有利于器官分化     ⒉细胞分裂素类(cytokinin)主要有激动素(KT)、6-苄基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)等。其作用是促进细胞分裂与分化,其中KT能明显促进芽的分化而抑制根的形成。 
    ⒊赤霉素(gibberellic acid)以GA3运用最广泛,有促进不定芽和幼株伸长的作用。 
    (五)有机附加物
    包括人工合成和天然的有机物,常用的有酵母提取物、椰乳、果汁等及相应的植物组织浸出液。对细胞和组织的增殖和分化有一定促进作用。此外琼脂在组培中作为凝固剂,是外植体的支持体,常用浓度为0.5-1%。
    (六)水
    培养基用水原则上使用蒸馏水,去离子水等,尤其在对化学成分要求较精确的试验中。但在组培苗的批量生产中,可选用自来水配制,以降低成本   
   

 

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