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细菌的两种鞭毛染色法



录入时间:2009-6-10 16:08:31 来源:青岛银河澳门官网入口

1.镀银法染色
(1)清洗玻片  选择光滑无裂痕的玻片,最好选用新的。为了避免玻片相互重叠,应将玻片插在专用金属架上,然后将玻片置洗衣粉过滤液中(洗衣粉煮沸后用滤纸过滤,以除去粗颗粒),煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾干,再放入浓洗液中浸泡5—6天,使用前取出玻片,用自来水冲去残酸,再用蒸馏水洗。将水沥干后,放入95%乙醇中脱水。
(2)菌液的制备及制片:菌龄较老的细菌容易失落鞭毛,所以在染色前应将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上(培养基表面湿润,斜面基部含有冷凝水)连续移接3-5代,以增强细菌的运动力。最后一代菌种放恒温箱中培养12—16h。然后,用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌液数环,移至盛有1—2mL无菌水的试管中,使菌液呈轻度混浊。将该试管放在37℃恒温箱中静置10min(放置时间不宜太长,否则鞭毛会脱落),让幼龄菌的鞭毛松展开。然后,吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端,立即将玻片倾斜,使菌液缓慢地流向另一端,用吸水纸吸去多余的菌液。涂片放空气中自然干燥。
    用于鞭毛染色的菌体也可用半固体培养基培养。方法是将0.3-0.4%的琼脂肉膏培养基熔化后倒入无菌平皿中,待凝固后在平板中央点接活化了3-4代的细菌,恒温培养12-16h后,取扩散菌落的边缘制作涂片。
(3)染色
①滴加A液,染4—6min。
②用蒸馏水充分洗净A液。
③用B液冲去残水,再加B液于玻片上,在酒精灯火焰上加热至冒气,约维持0.5—1min(加热时应随时补充蒸发掉的染料,不可使玻片出现干涸区)。
④用蒸馏水洗,自然干燥。
(4)镜检:先低倍,再高倍,最后用油镜检查。
结果:菌体呈深褐色,鞭毛呈浅褐色。
2.改良Leifson染色法
(1)清洗玻片法同1。
(2)配制染料  染料配好后要过滤15-20次后染色效果才好。
(3)菌液的制备及涂片
①菌液的制备同1。
②用记号笔在洁净的玻片上划分3—4个相等的区域。
③放1滴菌液于第一个小区的一端,将玻片倾斜,让菌液流向另一端,并用滤纸吸去多余的菌液。
④干燥  在空气中自然干燥。
(4)染色
①加染色液于第一区,使染料覆盖涂片。隔数分钟后再将染料加入第二区,依此类推(相隔时间可自行决定),其目的是确定最合适的染色时间,而且节约材料。
②水洗:在没有倾去染料的情况下,就用蒸馏水轻轻地冲去染料,否则会增加背景的沉淀。
③干燥:自然干燥。
(5)镜检  先低倍观察,再高倍观察,最后再用油镜观察,观察时要多找一些视野,不要企图在1-2个视野中就能看到细菌的鞭毛。
结果:菌体和鞭毛均染成红色。
(五)注意事项
1.镀银法染色比较容易掌握,但染色液必须每次现配现用,不能存放,比较麻烦。
2.Leifson染色法受菌种、菌龄和室温等因素的影响,且染色液须经15-20次过滤,要掌握好染色条件必须经过一些摸索。
3.细菌鞭毛极细,很易脱落,在整个操作过程中,必须仔细小心,以防鞭毛脱落。
4.染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
   

 

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