2.4　控制菌检查方法的验证
2.4.1　取规定量供试液及10—100CFU大肠埃希菌加入相应培养基中,按中国药典2005年版一部附录大肠埃希菌检查法检查,为试验组;同法操作,以金黄色葡萄球菌作为阴性对照菌,为阴性菌对照组;结果判断:阴性菌对照组不得检出阴性对照菌;试验组应检出试验菌,该试验方法成立。
2.4.2　预试验　取供试液:①10mL、供试液②每10mL离心后的上清液全量分别加至100、200、300mLBL培养基中,并加入10～100CFU大肠埃希菌,试验组未检出试验菌;取供试液;②每10mL离心后的上清液全量加至装有适量pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液容器中,采用薄膜过滤法,用总量为100、200、300mL的pH710无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液分次冲洗,每次50mL,分别取膜至100mLBL培养基中并加入10～100CFU大肠埃希菌,3种冲洗量试验组均检出试验菌。
2.4.3控制菌检查方法验证:大肠埃希菌采用低速离心加薄膜过滤法,用100mLpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,取膜至100mLBL培养基中,试验组检出试验菌,阴性菌对照组未检出阴性菌对照菌。
215采用经验证的方法检查以上3批头孢拉定胶囊,供试品组细菌、霉菌及酵母菌数均小于10个/g,未检出大肠埃希菌。
3、讨论
3.1头孢拉定胶囊对革兰氏阴性、阳性菌均有不同程度的抗菌活性,在本实验采用的常规法、培养基稀释法、低速离心加培养基稀释法、低速离心加薄膜过滤法的4种方法中,前3种方法试验菌回收率均为0%,采用预试验方法,快速将前几种方法筛掉,直接选择后法进行验证试验,头孢拉定在水中溶解性较小,采用低速离心方法,一是将有效活性部分沉于管底,二是除去不溶性颗粒,有利于进行薄膜过滤,两种方法联合使用,可消除药物抑菌活性对试验菌回收率的影响。
3.2经验证,生产企业在原、辅料、生产和检验等条件不变的情况下,头孢拉定胶囊的微生物限度检查可按以下方法进行检验。供试液:①每皿1mL计霉菌及酵母菌数;供试液;②每10ml离心后的上清液全量过滤,每膜用300mLpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲洗,测定细菌数;供试液;③每10ml离心后的上清液全量过滤,每膜用100mLpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲洗,取膜接种于100mLBL培养基中,按2005年版中国药典微生物限度检查法大肠埃希菌检查法检验控制菌。
   
   

 

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