3 结果与讨论
3.1 4株嗜酸乳杆菌的耐酸力评价
4株嗜酸乳杆菌菌株ATCC4356、La-IM1、La-IM2和La-IM3在pH2.5 的PBS 缓冲液中作用3h 后的活菌数分别为:2.92 ×108、1.2 ×108、1.13 ×109和 1.18 ×108 CFU/mL,存活率分别为:73.92%、70.91%、102.72%和83.69%。活菌数均大于108CFU/mL,存活率均高于60%,证明4 株嗜酸乳杆菌在pH 为2.5 的条件下酸耐受性较好,其中菌株La-IM2 的酸耐受性最高。 另外,菌株La-IM2 的存活率超过100%,原因可能是该菌株来自于开菲尔粒,而开菲尔粒的发酵酸度很高,该菌株经过长期低pH 值的酸适应后,菌株的酸耐受性进一步增加,因而变得较另外3株嗜酸乳杆菌菌株更为耐酸;其次,本实验采用MRS 液体培养基调节pH 值作为菌株的酸耐受基质,使得较耐酸的该菌株可以在其中继续生长,菌液浓度进一步升高,存活率超过 100%。
3.2嗜酸乳杆菌La-IM2 的生长曲线的测定结果
嗜酸乳杆菌La-IM2的生长曲线可知,在2h的时候该菌即可进入对数期生长,在10h后开始进入稳定期。随着培养时间的延长,培养基中的pH值逐渐降低,24h后降低为3.6,这说明该菌生长速率较快,产酸能力较强,适合于作益生菌菌株。
3.3 嗜酸乳杆菌La-IM2在不同pH 条件下的酸耐受性评价结果
嗜酸乳杆菌La-IM2在pH 1.5、pH 2.5、pH 3.5、pH 4.5、pH 7.2条件下作用1.5h后的活菌数分别为1.42 ×106、2.96 ×108、5.45 ×108、3.85 ×108、3.95×108CFU/mL;在3h后的活菌数分别为0、2.92 ×108、4.80 ×108、4.15 ×108、3.60 ×108 CFU/mL。该菌在pH 1.5 时培养3h后几乎没有活菌的存在,而培养 1.5h后的活菌数仍然在 106CFU/mL 以上,且其他作用条件下的活菌数均在108CFU/mL 以上,证明该菌株酸耐受性非常好。
通过模拟胃酸pH 值条件下的酸耐受性实验,证明嗜酸乳杆菌可以以较高的活菌数顺利过胃,进而起到益生菌的作用(国际乳品联合会IDF推荐益生菌浓度> 107CFU/g 时能顺利到达小肠并发挥益生作用)。但是,由于时间原因,本实验只对嗜酸乳杆菌La-IM2 在模拟胃酸pH 条件下的耐受性进行了评价,没有对其在模拟胃液环境下的存活率进行测定,因而不能完全说明该菌可以以较高的活菌数过胃。还需要进一步实验,以测定其在模拟胃液环境下的活菌数,最终证实其是否具有益生功效。
4 结 论
(1)4株嗜酸乳杆菌ATCC4356、La-IM1、La-IM2和La-IM3 在pH2.5 ,3h 条件下的酸耐受性较高,活菌数均大于108CFU/mL,存活率均高于60%。其中菌株La-IM2 的酸耐受性最高,活菌数达到 1.13 ×109 CFU/mL。
(2)嗜酸乳杆菌La-IM2满足典型的对数生长曲线规律,在2h 时该菌进入对数期生长,10h后进入稳定期。说明该菌生长速率很快,产酸能力较强,适合于用作益生菌菌株。
(3)嗜酸乳杆菌La-IM2虽然在pH1.5 时作用3 小时后活菌数为0,但是在其他作用条件下的活菌数均在 108CFU/mL以上,证明该菌株在模拟胃酸pH 条件下的耐受性较好,可以通过胃液的低酸性环境进而发挥益生功效。
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