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嗜酸乳杆菌酸耐受性的研究_2



录入时间:2009-2-3 9:57:38 来源:食品安全与检测

2 材料和方法
2.1材料
2.1.1菌株来源
嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus),代号为ATCC4356;La-IM1、La-IM2 和La-IM3 分离自内蒙古传统发酵乳制品。
2.1.2仪器设备
紫外分光光度计、光学显微镜 (OLMPUS )、梅特勒—托利多Delta320pH 计、电热手提式压力蒸汽灭菌器、恒温培养箱、超净工作台等。
2.1.3培养基
RS培养基[9]:5g/L酵母提取物,10g/L蛋白胨,10g/L牛肉膏,20g/L葡萄糖,2g/L K HPO ,2g/L柠檬酸二铵,5g/L 乙酸钠,0.58g/L MgSO .7H2O ,0.25g/L MnSO .4H2O, 调pH6.2~6.4,固体需加15g/L琼脂粉,121℃灭菌15min。
2.2方法
2.2.1菌种的活化与分纯
用接种环挑取少量冷冻干燥保藏的菌粉,接种于液体MRS 培养基中37℃,24h培养,连续传代两次进行活化;将活化后的菌种于MRS 固体培养基上划线培养,37℃,48h 培养;挑取半个单菌落染色镜检,如果镜检未发现杂菌,则用接种环挑取另外半个单菌落接种于液体MRS 培养基中培养并保存备用;如果镜检发现杂菌,则用接种环挑取单菌落于MRS 固体培养基上划线培养,再镜检,直至分纯。
2.2.2 4株菌酸耐受性的实验
将4 株嗜酸乳杆菌以3% 的接种量接种于MRS 液体培养基中进行传代一次。用盐酸调节MRS 液体培养基的pH 值为2.5,吸取4.5mL 于4 个试管中,置于高压灭菌锅内进行121℃、15min灭菌。按照 10%的添加量吸取500 μL菌液分别加入到4个试管中作用3h。作用结束后,将试管在漩涡混匀器上进行震荡混匀,平板涂布进行活菌计数。 
2.2.3嗜酸乳杆菌La-IM2生长曲线的测定
将嗜酸乳杆菌La-IM2 按3%的接种量,接种到装有300mL液体培养基的锥形瓶中,37℃进行培养。每隔2h在无菌超静工作台中取出20mL 用于测OD600 和pH 值,直至24h,然后绘制生长曲线。 
2.2.4嗜酸乳杆菌La-IM2在不同pH值条件下的酸耐受性实验
用盐酸调节PBS缓冲液的pH值分别为 1.5、2.5、3.5、4.5、7,然后将嗜酸乳杆菌La-IM2 按 10%的接种量接种于以上pH 值的PBS 缓冲液中,在37℃下进行作用,作用时间分别为1.5h和3h,随后将试管在漩涡混匀器上进行震荡混匀,平板涂布进行活菌计数。 
2.2.5活菌计数方法 
每个样品取3 个平行,用PBS 缓冲液 (pH  7)逐步稀释5个梯度。以MRS 固体培养基为计数培养基,于37℃培养48~72h后平板计数[10],选择平板上菌落数在30~300个菌落的平板,统计菌落数,最后求取平均值。    
   

 

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