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食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验 2——GB



录入时间:2009-1-12 15:52:50 来源:青岛银河澳门官网入口

6操作步骤
6.1样品处理按无菌操作称取食品检样25g(ml),加人225mL灭菌生理盐水,研成匀浆制成混悬液。
6.2培养将上述混悬液吸取5ml,接种于50ml工葡萄糖肉浸液肉汤,或直接划线接种于血平板。如检样污染严重,可同时按上述量接种匹克氏肉汤,经36℃ 土l℃ 培养24h接种血平板,置36℃ 士1℃ 培养24h,挑起乙型血圆形突起的细小菌落,在血平板上分纯,然后观察溶血情况及革兰氏染色,并进行链激酶试验及杆菌肤敏感试验。
6.3形态与染色本菌里球形或卵圆形,直径0.5um ——1um链排列,链长短不一,颊者4个~8个细胞组成,长者20个一30个,链的长短常与细菌的种类及生长环境有关;液体培养中易呈长链;在固体培养基中常呈短链,不形成芽抱,无鞭毛,不能运动。
6.4培养特性该菌营养要求较高,在普通培养纂上生长不良,在加有血液、血清培养荃中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色,半透明或不透明,表面光滑,有乳光,直径约0.5mm~0.75mm,为圆形突起的细小菌落,乙型溶血链球菌周围有2mm—4mm。界限分明、无色透明的溶血圈。
6.5链激酶试验致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶(即溶纤维蛋白酶),此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原,使成血浆蛋白酶,而后溶解纤维蛋白。吸取草酸钾血浆0.2ml,加0.8ml灭菌生理盐水,混匀,再加人18h~24卜、36℃ 士1℃ 培的链球菌培养物0.5 m及0.25%氯化钙0.25ml(如氯化钙已潮解,可适当加大至0.3%——0.35 %)振荡摇匀,置于36℃ 士1℃ 水中10min,血浆混合物自行凝固(凝固程度至试管倒置,内容物不流动),然后观察凝固块重新完全溶解的时间,完全溶解为阳性,如24h后不溶解即为阴性。
草酸钾人血浆配制:草酸钾0.01g放人灭菌小试管中,再加人5ml血,混匀,经离心沉淀,吸取上清液即为草酸钾人血浆。6.6杆菌肚敏感试验挑取乙型溶血性链球菌液,涂布子血平板上,用灭菌镊子夹取每片含有。.04单位的杆菌肤纸片,放于上述平板上,于36℃ 士1℃ 培养18h—24h,如有抑菌带出现即为阳性,同时用已知阳性菌株作为对照。
    
   

 

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