银河澳门官网入口,银河集团网址登录





银河澳门官网入口,银河集团网址登录

中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->微生物检测方法和标准->食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验2——GB

食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验2——GB



录入时间:2009-1-9 15:17:24 来源:青岛银河澳门官网入口

6.操作步骤
6.1前增菌和增菌冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。以无菌操作取器g(mL),加在装有225mL缓冲蛋白陈水的500mL广口瓶内。固体食品可先应用均质器以8000r/min——10000r/min,或用乳钵加灭菌砂磨碎,粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化,于36℃士1℃培养4h(干蛋品培养18h——24h),移取10mL,转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内,于42℃培养18h——24h。同时,另取10mL,转种于100mL亚硒酸盐胧氨酸增菌液内,于36℃士1℃培养18h——24h。鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。各取25g〔25mL)加人灭菌生理盐水25mL,按前法做成检样匀液;取25mL,接种于100mL氯化镁孔雀绿增菌掖或四硫磺酸钠煌绿增菌液内,于42℃培养24h;另取25mL接种于100mL亚硒酸盐胧氨酸增菌液内,于36℃士1℃培养18h——24h。
6.2分离取增菌液1环,划线接种于一个亚硫酸秘琼脂平板和一个DHL琼脂平板(或HE琼脂平板、WS或SS琼脂平板)。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于36℃士1℃分别培养18h——24h(DHL、HE、WS、SS)或4oh——48h(BS),观察各个平板上生长的菌落,沙门氏菌I、II、IV、V、VI和沙门氏菌皿在各个平板上的菌落特征见表l。
6.3生化试验
6.3.1自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落,分别接种三糖铁琼脂。在三糖铁琼脂内。
6.3.2在接种三糖铁琼脂的同时,再接种蛋白膝水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基和赖氨酸脱叛酶试验培养基及对照培养藻各一管,于36℃士1℃培养18h~24h,必要时可延长至48h,按表3判定结果。按反应序号分类,沙门氏菌属的结果应属于Al、AZ和B1,其他5种反应结果均可以排除。
6.3.2.1反应序号Al:典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、氰化钾和赖氨酸三项中有一项异常,按表4可判定为沙门氏菌。如有两项异常,则按A3判定为弗劳地氏柠檬酸杆菌。6.3.2.2反应序号AZ:补做甘露醇和山梨醇试验,按表5判定结果。
6.3.2.3反应序号Bl:补做ONPG。ONPG+为大肠埃希氏菌,ONPG一为抄门氏菌。同时,沙门氏菌应为赖氨酸+,但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸一。
6.3.2.4必要时按表6进行沙门氏菌生化群的鉴别。
6.4血清学分型鉴定
6.4.1抗原的准备一般采用1.5%琼脂斜面培养物作为玻片凝集试验用的抗原。O血清不凝集时,将菌株接种在琼脂量较高的〔如2.5%一3%)培养基上再检查;如果是由于vi抗原的存在而阻止了O凝集反应时,可挑取菌苔于1mL生理盐水中做成浓菌液,于酒精灯火焰上煮沸后再检查。H抗原发育不良时,将菌株接在0.7%——0.8%半固体琼脂平板的中央,侠菌落蔓延生长时,在其边缘部分取菌检查;或将菌株通过装有0.3%~0.4%半固体琼脂的小玻管1次一2次,自远端取菌培养后再检查。
6.4.2 0抗原的鉴定用A——F多价。血清做玻片蔓集试验,同时用生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株,不能分型。被A——F多价O血清凝集者,依次用04;03、10;07;08;09;02和011因子血清做凝集试验。根据试验结果,判定O群。被03、10。血清凝集的菌株,再用010、015、O34、019单因子血清做凝集试验,根据试验结果,判定O群...被03、10血清凝集的菌株,再用010、015、034、019单因子血清做凝集试验,判定El、EZ、E3、E4各亚群,每一个O抗原成分的最后确定均应根据0单因子血清的检查结果,没有O单因子血清的要用两个O复合因子血清进行核对.不被A——F多价O血清凝集者,先用57种或163种沙门氏菌因子血清中的9种多价0血清检查,如有其中一种血清凝集,则用这种血清所包括的O群血清逐一检查,以确定O群。每种多价O血清所包括的O因子如下:O多价1 A,B,C,D,E,F群(并包括6,14群)0多价2 13,16,17,18,21群O多价3 28,30,35,38,39群O多价4 40,41,42,43群O多价5 44,45,47,48群O多价6 50,51,52,53群O多价7 55,56,弓7,58群O多价8 59,60,61,62群O多价9 63,65,66,67群6.4.3 H抗原的鉴定不常见的菌型,先用163种沙门氏菌因子血清中的8种多价H血清检查,如有其中一种或两种血清凝集.则再用这一种或两种血清所包括的各种H因子血清逐一检查,以确定第1相和第2相的H抗原。8种多价H血清所包括的H因子如下:H多价l a,b,c,d,iH多价2 eh,enx,enz15,fg,gms,gpu,gp,gq,mt,gz51H多价3 k,r,y,z,z10,Iv,lw,lz13,lz28,lz40
H多价4 1,2;1,5;1,6;l,7;z6
H多价5 z4z23;z4z24;z4z32;z29,z35,z36,z38。H多价6:z39,z41,z42,z44
H多价7 z32,z53,z54,z55H多价8 z56,z57,z60,z61,z62每一个H抗原成分的最后确定均应根据H单因子血清的检查结果,没有H单因子血清的要用两个H复合因子血清进行核对。检出第1相H抗原而未检出第z相H抗原的或检出第2相H抗原而未检出第1相H抗原的,可在琼脂斜面上移种1代~2代后再检查。如仍只检出一个相的H抗原,要用位相变异的方法检查其另一个相。单相菌不必做位相变异检查。位相变异试验方法如下:小玻管法:将半固体管(每管约1mL——2ml)在酒精灯上溶化并冷至50℃,取已知相的H因子血清0.05mL~0.lmL,加人于溶化的半周体内,混匀后,用毛细吸管吸取分装于供位相变异试验的小玻管内,俊凝固后,用接种针挑取待检菌,接种子一端。将小玻管平放在平皿内,并在其旁放一团湿棉花,以防琼脂中水分蒸发而干缩,每天检查结果,待另一相细菌解离后,可以从另一端挑取细菌进行检查。培养墓内血清的浓度应有适当的比例,过高时细菌不能生长,过低时同一相细菌的动力不能抑制。一般按原血清l:200~1:800的量加人。小倒管法:将两端开口的小玻管(下端开口要留一个缺口,不要平齐)放在半固体管内,小玻管的上端应高出于培养基的表面,灭菌后备用。临用时在酒精灯上加热溶化,冷至50℃,挑取因子血清1环,加入小套管中的半固体内,略加搅动,使其混匀,佼凝固后,将待检菌株接种于小套管中的半固体表层内,每天检查结果,待另一相细菌解离后,可从套管外的半固体表面取菌检查,或转种1%软琼脂斜面,于37℃培养后再做凝集试验。简易平板法:将0.7%~0.8%半固体琼脂平板烘干表面水分,挑取因子血清1环,滴在半固体平板表面,放置片刻,待血清吸收到琼脂内,在血清部位的中央点种待检菌株,培养后,在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌检查。
6.4.4 VI抗原的鉴定用vi因子血清检查。已知具有Vi抗原的菌型有:伤寒沙门氏菌,丙型副伤寒沙门氏菌,都柏林沙门氏菌。6.5菌型的判定和结果报告综合以上生化试验和血清学分型鉴定的结果,按照表7或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型,并报告结果。   
   

 

上一篇:食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验1——GB

下一篇:食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验1——GB

首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | shchuhu.com
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294