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我国行业标准-出口食品中霍乱弧菌检验方法——2.1



录入时间:2008-12-25 13:43:02 来源:青岛银河澳门官网入口

      A5  T1N1琼脂
胰胨                        10.0g
氯化钠                      10.0g
琼脂                        20.0g
蒸馏水                      1000mL
将各成分加热蒸馏水中,充分混匀,搅拌加热直至煮沸。121℃高压灭菌15min。最终pH(7.2±0.2)。倾注平板备用。
在上项成分中改变氯化钠的含量(T1N0:不加氯化钠;T1N3:氯化钠为30.0g),去除琼脂可制成T1N0和T1N3肉汤。
A6  精氨酸葡萄糖斜面琼脂(AGS)
蛋白胨                      5.0g
酵母浸膏                    3.0g
胰胨                        10.0g
氯化钠                      20.0g
葡萄糖                      1.0g
精氨酸                      5.0g
柠檬酸铁胺                  0.5g
硫代硫酸钠                  0.3g
溴甲酚紫                    0.02g
琼脂                        13.5g
蒸馏水                      1 000mL
将各成分加入蒸馏水中,充分混匀,搅拌加热至煮沸约1min。最终pH(6.8~7.0)。分装13mm×100mm试管,121℃高压灭菌15min,高压后制成高层斜面备用。
A7  Hugh-Leifon葡萄糖肉汤(HLGB)
蛋白胨           5.0g  
酵母浸膏          0.5g  
氯化钠              30.0g  
葡萄糖           10.0g  
溴甲酚紫                   0.015g  
蒸馏水                     1 000Ml
将各成分(除溴甲酚紫外)加入蒸馏水中,充分混匀,搅拌加热溶解,调节pH7.4,加入溴甲酚紫,混匀,分装于15mm×150mm试管的三分之一容量,121℃高压灭菌15min。
接种后覆盖约1mL灭菌矿物油以检查葡萄糖发酵。
A8  赖氨酸脱羧酶肉汤(Moeller)
蛋白胨                     5.0g
牛肉浸膏                   5.0g
葡萄糖                     0.5g
溴甲酚紫                   0.01g
甲酚红                     0.005g
吡哆醛                     0.005g
蒸馏水                     1 000mL
将各成分溶于蒸馏水中,轻轻搅拌加热至溶解。溶解L-赖氨酸10.0g。分装3mL于13mm×100mm试管中。另以不加氨基酸的基础液作试验对照。121℃高压灭菌10min,接种后覆盖约1mL矿物油。最终pH(6.0±0.2)。
A9  MR-VP肉汤
(月示)胨           7.0g  
葡萄糖           5.0g  
磷酸氢二钾                  5.0g  
蒸馏水                      1000.0mL  
将各成分溶于800mL蒸馏水中,微热过滤,冷却至20℃,稀释到1000mL。121℃高压灭菌12min~15min。最终pH(6.9±0.2)。
A10  ONPG胨水
1%蛋白胨水(pH7.5)        300.0mL
ONPG溶液                  100.0mL
  称取磷硝基酚-β-D-半乳糖苷0.6g溶于0.01mol/L磷酸氢二钠缓冲液100mL中,过滤除菌,加入300mL灭菌蛋白胨水中混匀,分装试管,每管约2mL~3mL。避光保存,如变黄应弃去。
  接种后培养液变黄为阳性。
A11  Andrade氏糖类肉汤和指示剂
基础液:
牛肉浸膏                   3.0g
蛋白胨                     10.0g
氯化钠                     10.0g
蒸馏水                     1 000mL
调节pH值(7.2±0.2)。在121℃高压灭菌15min。
Andrade氏指示剂:
酸性品红                   0.2g
蒸馏水                     100.0g
1mol/L氢氧化钠             16.0mL
使用前要脱色。如果需要加1mL~2mL氢氧化钠溶液,加10mL指示剂到1L基础液中。
糖储备液:
用葡萄糖、乳糖、蔗糖和甘露糖配制10%溶液。用卫矛醇、水杨素和其他糖类配制5%溶液。通过0.20μm滤膜过滤除菌。用基础液按1:10稀释糖溶液,加Andrade氏指示剂至所需浓度,混合。
A12  氧化酶试剂
    溶解1.0g二盐酸四甲基对苯二胺于盛有100mL水的暗色玻璃瓶中,冰箱内存放不超过7天,勿需高压灭菌。阳性培养物在1min内产生黑紫色斑点。
A13  粘丝试验溶液
     溶解0.5g去氧胆酸钠于100mL水中,拧紧瓶盖保存于冰箱中。勿需高压灭菌。
     霍乱弧菌在该溶液中被乳化后,1min内形成粘液样团块。当粘块从玻片上被拉出2cm~3cm时成粘丝。   
   
   
   

 

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