附 录 A 培养基和试剂的配制(补充件)
A1 胰(月示)-亚硫酸盐-环丝氨酸(TSC)琼脂
胰(月示) 15.0g
大豆胨 5.0g
酵母膏 5.0g
偏亚硫酸氢钠[sodium bisulfite(meta)] 1.0g
柠檬酸铁铵 1.0g
琼脂 20.0g
加蒸馏水稀释到1000mL，调至pH7.6±0.1，分装到500mL烧瓶中，每瓶250mL。121℃高压灭菌15min，倒平皿前，每250mL培养基(50℃)中，加过滤除菌的0.5％ D-环丝氨酸溶液20.0mL。
制作卵黄平板：加50％卵黄乳液20 mL到250 mL含D-环丝氨酸培养基中，倾注到无菌平皿中，每皿约15mL。使用前应将平皿置室温使其干燥。
A2 D-环丝氨酸溶液
溶解1gD-环丝氨酸于200 mL磷酸盐缓冲液(c＝0.05mol/L)(pH8.0±0.1)中(不加热)，经0.45μm滤膜过滤除菌。
A3 卵黄乳液
用硬刷刷洗鲜蛋，沥干，放70％乙醇中浸泡1h。以无菌操作取出蛋黄，加等体积无菌0.8％氯化钠溶液，混合置4℃贮存。
A4 缓冲动力-硝酸盐培养基
牛肉膏 3.0g
蛋白胨 5.0g
硝酸钾 5.0g
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 2.5g
半乳糖 5.0g
甘油 5.0g
琼脂 3.0g
用蒸馏水溶解并稀释到1000mL。调至pH7.3±0.1，分装试管，每管11mL。121℃高压灭菌15min。
A5 乳糖-明胶培养基
胰(月示) 15.0g
酵母膏 10.0g
乳糖 10.0g
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 5.0g
酚红 0.05g
明胶 120.0g
用蒸馏水溶解并稀释到1000mL，调至pH7.5±0.1，加入乳糖和酚红。分装试管，每管10 mL。121℃高压灭菌15min。
A6 产芽孢肉汤
多价胨(polypeptone) 15.0g
酵母膏 3.0g
可溶性淀粉 3.0g
硫酸镁 0.1g
硫乙醇酸钠 1.0g
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 11.0g
用蒸馏水溶解稀释到1000mL，调至pH7.8±0.1，分装试管，每管15 mL。121℃高压灭菌15min。
A7 多价蛋白胨-酵母膏(PY)培养基
多价胨 20.0g
酵母膏 5.0g
氯化钠 5.0g
用蒸馏水溶解并稀释到1000mL, 调至pH6.9±0.1, 分装到带螺帽的试管内,每管9mL。121℃高压灭菌15 min。
A8 硫乙醇酸盐液体培养基
胰酪胨 15.0g
L-胱氨酸 0.5g
氯化钠 2.5g
葡萄糖 5.0g
酵母膏 5.0g
硫乙醇酸钠(或硫乙醇酸) 0.5g
刃天青钠溶液(1:1000)(新鲜配制) 1 mL
琼脂 0.75g
将胱氨酸、氯化钠、葡萄糖、酵母膏和胰胨同1000mL蒸馏水混合，并在阿诺氏消毒器或蒸气浴中加热，直至完全溶解，并加入硫乙醇酸钠或硫乙醇酸溶液，使溶解。如必要可用1mol/L氢氧化钠调整pH，使消毒后的pH在7.1±0.2，加刃天青钠溶液，混合，将培养基分装到150mm×16mm螺旋盖试管内，每管10mL，121℃高压灭菌20min。
A9 蛋白胨水
在2000 mL蒸馏水中溶解蛋白胨2.0g，调至pH7.0±0.1。在200 mL瓶中分装90 mL，在500 mL锥形瓶中分装225 mL。121℃高压灭菌15min。
A10 亚硝酸盐试剂
a．试剂甲 在1000mL 5mol/L乙酸中溶解对氨基苯磺酸8g；
b. 试剂乙 在1000mL 5mol/L乙酸中溶解α-萘酚5g。
A11 缓冲甘油-氯化钠溶液
在900mL蒸馏水中溶解氯化钠4.2g，加无水磷酸氢二钾12.4g，无水磷酸二氢钾4.0g和甘油100mL，混合，充分溶解。调至pH7.2。121℃高压灭菌15min。
配制双料缓冲甘油溶液(20％)时，用甘油200mL和蒸馏水800mL。
上一篇：中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌——1
下一篇：中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢)计数方法
