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中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌——2



录入时间:2008-12-19 15:40:18 来源:青岛银河澳门官网入口

附 录 A  培养基和试剂的配制(补充件)
A1 胰(月示)-亚硫酸盐-环丝氨酸(TSC)琼脂  
胰(月示)                              15.0g  
大豆胨                 5.0g  
酵母膏                 5.0g  
偏亚硫酸氢钠[sodium bisulfite(meta)]   1.0g  
柠檬酸铁铵               1.0g  
琼脂                                   20.0g 
 加蒸馏水稀释到1000mL,调至pH7.6±0.1,分装到500mL烧瓶中,每瓶250mL。121℃高压灭菌15min,倒平皿前,每250mL培养基(50℃)中,加过滤除菌的0.5% D-环丝氨酸溶液20.0mL。 
 制作卵黄平板:加50%卵黄乳液20 mL到250 mL含D-环丝氨酸培养基中,倾注到无菌平皿中,每皿约15mL。使用前应将平皿置室温使其干燥。
A2 D-环丝氨酸溶液 
 溶解1gD-环丝氨酸于200 mL磷酸盐缓冲液(c=0.05mol/L)(pH8.0±0.1)中(不加热),经0.45μm滤膜过滤除菌。
A3 卵黄乳液 
 用硬刷刷洗鲜蛋,沥干,放70%乙醇中浸泡1h。以无菌操作取出蛋黄,加等体积无菌0.8%氯化钠溶液,混合置4℃贮存。
A4 缓冲动力-硝酸盐培养基   
牛肉膏                3.0g   
蛋白胨                5.0g   
硝酸钾                5.0g   
磷酸氢二钠(Na2HPO4)                 2.5g   
半乳糖                5.0g   
甘油                 5.0g   
琼脂                                  3.0g 
 用蒸馏水溶解并稀释到1000mL。调至pH7.3±0.1,分装试管,每管11mL。121℃高压灭菌15min。
A5 乳糖-明胶培养基   
胰(月示)               15.0g   
酵母膏                               10.0g   
乳糖                 10.0g   
磷酸氢二钠(Na2HPO4)                5.0g      
酚红                 0.05g   
明胶                                  120.0g 
 用蒸馏水溶解并稀释到1000mL,调至pH7.5±0.1,加入乳糖和酚红。分装试管,每管10 mL。121℃高压灭菌15min。
A6 产芽孢肉汤  
多价胨(polypeptone)                      15.0g  
酵母膏                  3.0g  
可溶性淀粉                3.0g  
硫酸镁                                   0.1g  
硫乙醇酸钠                1.0g  
磷酸氢二钠(Na2HPO4)                      11.0g 
 用蒸馏水溶解稀释到1000mL,调至pH7.8±0.1,分装试管,每管15 mL。121℃高压灭菌15min。
A7 多价蛋白胨-酵母膏(PY)培养基  
多价胨                                   20.0g  
酵母膏                  5.0g  
氯化钠                  5.0g 
 用蒸馏水溶解并稀释到1000mL, 调至pH6.9±0.1, 分装到带螺帽的试管内,每管9mL。121℃高压灭菌15 min。
A8 硫乙醇酸盐液体培养基  
胰酪胨                                   15.0g  
L-胱氨酸                 0.5g  
氯化钠                  2.5g  
葡萄糖                  5.0g  
酵母膏                  5.0g  
硫乙醇酸钠(或硫乙醇酸)          0.5g  
刃天青钠溶液(1:1000)(新鲜配制)      1 mL  
琼脂                                     0.75g 
 将胱氨酸、氯化钠、葡萄糖、酵母膏和胰胨同1000mL蒸馏水混合,并在阿诺氏消毒器或蒸气浴中加热,直至完全溶解,并加入硫乙醇酸钠或硫乙醇酸溶液,使溶解。如必要可用1mol/L氢氧化钠调整pH,使消毒后的pH在7.1±0.2,加刃天青钠溶液,混合,将培养基分装到150mm×16mm螺旋盖试管内,每管10mL,121℃高压灭菌20min。
A9 蛋白胨水 
 在2000 mL蒸馏水中溶解蛋白胨2.0g,调至pH7.0±0.1。在200 mL瓶中分装90 mL,在500 mL锥形瓶中分装225 mL。121℃高压灭菌15min。
A10 亚硝酸盐试剂
a.试剂甲  在1000mL 5mol/L乙酸中溶解对氨基苯磺酸8g;
b. 试剂乙  在1000mL 5mol/L乙酸中溶解α-萘酚5g。
A11 缓冲甘油-氯化钠溶液 
 在900mL蒸馏水中溶解氯化钠4.2g,加无水磷酸氢二钾12.4g,无水磷酸二氢钾4.0g和甘油100mL,混合,充分溶解。调至pH7.2。121℃高压灭菌15min。 
 配制双料缓冲甘油溶液(20%)时,用甘油200mL和蒸馏水800mL。   
   

 

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