附 录 A
培 养 基 和 试 剂 (补充件)
A1 普通肉汤培养基
成分:
牛肉膏 5.0g
氯化钠 5.0g
蛋白胨 20.0g
蒸馏水 1000.0mL
制法:将以上成分混合加热溶化,调至pH7.4~7.6,分装试管,121℃高压灭菌30min。
A2 胰蛋白胨大豆肉汤
成分:
胰蛋白胨 17.0g
植物蛋白胨 3.0g
氯化钠 5.0g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 2.5g
葡萄糖 2.5g
蒸馏水 1000.0mL
制法:将各成分溶于蒸馏水中,必要时加热使完全溶解,分装于试管或玻瓶中,121℃ 高压灭菌15min,最终pH7.3±0.2。
注:制备双料胰蛋白胨大豆肉汤时,除蒸馏水外,其他成分加倍,配制10%或20%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤时,可将氯化钠量增加至所需浓度。
A3 Baird-Parker培养基
成分:
胰蛋白胨 10.0g
牛肉膏 5.0g
酵母膏 1.0g
丙酮酸钠 10.0g
甘氨酸 12.0g
氯化锂(LiCl·6H2O) 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 950.0mL
制法:将各成分加于蒸馏水中,加热煮沸使完全溶解,冷至25℃,调至pH7.0±0.2,分装每瓶95mL,121℃高压灭菌15 min,临用时加热溶化琼脂,冷至50℃左右,于每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL,摇匀后倾注平皿培养基,应是致密不透明的,使用前在冰箱贮存不得超过48 h。
卵黄亚碲酸盐增菌剂配制:
将新鲜鸡蛋浸泡在适当的HgCl2溶液(1:1000)中约1 min,以无菌操作打开鸡蛋,使蛋黄与蛋白分开,将蛋黄加于生理盐水中(3+7,V/V)充分摇匀,于50mL蛋黄乳液中加入10mL过滤除菌的1%亚碲酸钾水溶液,混匀,4±1℃贮存。
A4 甲苯胺蓝-DNA琼脂
成分:
脱氧核糖核酸(DNA) 0.3g
琼脂 10.0g
氯化钙(CaCl2无水) 1.1g
氯化钠 10.0g
甲苯胺蓝(O) 0.083g
三羟甲基氨基甲烷 6.1g
蒸馏水 1000.0mL
制法:将三羟甲基氨基甲烷溶解于蒸馏水中,调至pH9.0,除甲苯胺蓝(O)外将其余各项成分加热使溶解。再将甲苯胺蓝(O)溶于培养基中。分装于塞有橡皮塞的烧瓶中。如立即使用可不需灭菌。已灭菌的培养基在室温可存放4个月无变化,并经数次熔化后仍可使用。
A5 生理盐水 成分:
氯化钠 8.5g
蒸馏水 1000.0mL
制法:将氯化钠溶于蒸馏水中,分装于适当容器中,121℃高压灭菌15 min。
A6 凝固酶试验兔血浆
临用时取3.8%(取柠檬酸钠3.8 g加蒸馏水100 mL,待溶解后过滤,121℃高压灭菌15min)柠檬酸钠1份,加入新鲜兔血4份,混匀后放冰箱中使用球沉降(或以3000r/min离心30min)后取上清液进行试验。
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