5.1.4.2 IMS分离5.1.4.2.1试剂制备A由10火SLA型缓冲液配制稀释的1火SIA型缓冲液用试剂水作为稀释剂每个样品制备lmL的1只SIA型缓冲液。注意：长时间在O℃ ～4℃ 储存后，可能会在IOxSL一A型缓冲液中形成一些结晶沉淀。为了确保这些沉淀的结晶能够再溶解，使用前应将其置室温（15℃ ～22℃ ）恒温H加lm工一10只SLA型缓冲液和1 mL 10*SL B型缓冲液到一侧平面试管中5.1.4.2.2卵囊捕获A定量转移10m工水样浓缩物到含有SI、缓冲液的一侧平面试管中H将抗隐抱子虫抗体和抗贾第鞭毛虫的磁微粒原液置于漩涡混合器上搅拌，以便使珠粒悬浮通过倒置试管的方法保证珠粒再悬浮．并确定底部没有残留的小团。C在含有水样浓缩物和SI、一缓冲液样品的一侧试管中各加100川上述悬浮的微粒。D将样品试管固定到旋转式的搅拌器上，在大约25r/min的条件下至少旋转lh E至少旋转lh后．将试管从搅拌器上取下，然后再将其放在磁粒浓缩器（MPC一1）上，并将试管有平面的一边朝向磁铁F用手柔和地大约900角头尾相连地摇动试管，使试管的盖顶和基底轮流上下倾斜以每秒大约倾斜一次的频率持续2minG如果让MPC-I中的样品静置105以上，就要在进行下一个步骤之前，重复前一个（即步骤F)步骤。H立即打开顶端的盖，同时将保持在MPC一1上的试管中的所有上清液倒到一个适当的容器中做这一步骤时，不要摇动试管，也不要将试管从MPcl土取下I将试管从MPCI上取下，加lmLX SL一A型缓冲液非常柔和地将试管中的所有物质再悬浮。不要形成漩涡。J将样品试管中的所有液体定量转移到有标签的1 . smL微量离心管中K将微量离心管放到另一磁粒子浓缩器（MPCM）中，MPCM在放微量离心管的位置有一根磁条。L用手180°角轻轻地摇动试管每秒大约摇动一个180°角的频率，持续大约1 min在这一步结束时，珠粒和卵囊会在试管的背面形成一个褐色圆点。M立即从留在MPCM上的试管和顶盖中的上清液吸出。如果同时处理一个以上的样品，就要在吸去每个试管的上清液之前，进行3个180°角的摇动或滚动的动作。小心不要扰乱与磁铁邻近管壁上的附着物不要摇动试管。当进行这些步骤时，不要将试管从MPCM上取下5.1.4.2.3磁珠与抱（卵）囊复合物的分离A将磁条从MPC一M上取下B加50ul 0.1 mol/l的盐酸（HCI）至上述微量离心管中，用涡旋棍合10s。C将试管放在MPC一M上，然后让它在室温垂直静止10min。D用力涡旋5s——10s.E保证所有样品都在试管的底部，然后将微量离心管放在DynalMPcM上
F再将磁条放到MPCML，然后大约90°角头尾相连地轻轻摇动试管。使试管的盖顶和基底轮流上下倾斜，以每秒大约倾斜一次的频率持续305G准备一个井型载玻片，然后加5ul 1mol/l的氢氧化钠（NaOH）溶液至样本井中。H不要将微量离心管从MPCM上取下将所有样品从MPCM上的微量离心管中转移到有氢氧化钠的样品井中。不要扰乱试管背壁上的珠粒。l重复步骤A一F，然后将样品转移到相同的井形载玻片上5.1.4.3染色5.1.4.3.1将有样品的井形载玻片放到42℃的培养箱中，蒸发干5.1.4.3.2在每一含有干样品的井中加一滴（50ul）纯甲醇，然后让它空干3 min——5 min。
5.1.4.3.3用试管准备所需体积（每井50ul）的抗隐抱子虫抗体和抗贾第鞭毛虫单克隆抗体异硫氰酸荧光素（FITC）工作稀释液。5.1.4.3.4加50ul用上述异硫氰酸荧光素（FITC）单克隆抗体工作稀释液至含样本井中。将载玻片放到湿室中于37℃培养30 min左右5.1.4.3.5 30min后，取出载玻片，然后用一个干净的顶端带有真空源的巴斯德移液管轻轻地从每个井边吸掉过量的荧光素标记单克隆抗体5.1.4.3.6在每个井中加70ul的PBS，静止1min一2 min后．吸掉多余的PBS。5.1.4.3.7加50ulDAPI溶液（使用时配制，即加10ul2mg/ml溶于纯甲醇中的DAPI于50ml的PHS中）到侮个井中，然后让它在室温静止2面n左右。5.1.4.3.8吸掉过量的DAPI溶液。5.1.4.3.9加70uL的PBS到每个井中，静止1 min一2 mln后，吸掉多余的PBSo5.1.4.3.1O加70ul的试剂水到每个井中，静止lmin后，吸掉多余的试剂水5.1.4.3.11 让载玻片在暗处干燥后，加一滴含防荧光减弱的封固剂到每个井的中心。
5.1.4.3.12在井形载玻片上盖七盖玻片，然后将它存放在干燥的暗盒中，备查   
   

 

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