3.1多管发酵法3.1.1范围本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的耐热大肠菌群。本法适用于生活饮用水及其水源水中耐热大肠菌群的测定。3.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1.2.1耐热大肠菌群thermotolerant coliform bacteria用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5℃ 仍能生长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。3.1.3培养基与试剂3.1.3.1 EC培养墓3.1.3.1.11成分： A 胰蛋白脉 20g B 乳糖 5g C 3号胆盐或提合胆盐〕 1.5g D 磷酸氢二钾 4g
E 磷酸二氢钾 1.5g F 氯化钠 5g G 蒸馏水 1000mL3.1.3.1.2制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，分装到带有倒管的试管中，68.95 kPa (l15℃，10lb）高压灭菌20min，最终pH为6.9士0.23.1.3.2伊红美蓝琼脂同2.1.3.33.1.4仪器3.1.4.1恒温水浴：44.5℃ 士0.5℃ 或隔水式恒温培养箱。3.1.4.2其他同总大肠菌群多管发酵法（2.1.4.1——2.1.4.9 )3.1.5检验步骤3.1.5.1自总大肠菌群乳糖发酵试验中的阳性管（产酸产气）中取1滴转种于EC培养基中．置44.5℃ 水浴箱或隔水式恒温培养箱内（水浴箱的水面应高于试管中培养基液面），培养24h士2h，如所有管均不产气，则可报告为阴性，如有产气者，则转种于伊红美蓝琼脂平板上，置44.5℃ 培养18h—24h，凡平板L有典型菌落者，则证实为耐热大肠菌群阳性3.1.5.2如检测未经氯化消毒的水，且只想检测耐热大肠菌群时，或调查水源水的耐热大肠菌群污染时，可用直接多管耐热大肠菌群方法，即在第一步乳糖发酵试验时按总大肠菌群2.1.5工接种乳糖蛋白陈培养液在44.5℃ 士0.5℃ 水浴中培养，以下步骤同3.1.5.1。3.1.6结果报告根据证实为耐热大肠菌群的阳性管数，查最可能数（MPN）检索表，报告每100 mL水样中耐热大肠菌群的最可能数（MPN）值。3.2滤膜法3.2.1范围本标准规定了用滤膜法测定生活饮用水及低浊度水源水中的耐热大肠菌群本法适用于生活饮用水及低浊度水源水中耐热大肠菌群的测定3.2.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.2.2.1 耐热大肠菌群滤膜法mcmbrane filter technique for thermotolerant colifl甘nl bacteria耐热大肠菌群滤膜法是指用孔径为0.45um的滤膜过滤水样，细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在添加乳糖的选择性培养基上，44.5℃ 培养24h能形成特征性菌落以此来检测水中耐热大肠菌群的方法3.2.3培养基与试荆3.2.3.1 MFC培养基3.2.3.1.1成分 A 胰陈 10g B 多陈 5g C 酵母浸膏 3g D 氯化钠 5g E 乳糖 12.5g F 3号胆盐或混合胆盐 1.5g
G 琼脂 15g H 苯胺蓝 0.2g I 蒸馏水 1000ml
3.2.3.1.2制法 在l000mL蒸馏水中先加人玫红酸（10g/l）的0.2mol/L氢氧化钠溶液10mL，混匀后，取500mL加人琼脂煮沸溶解，于另外500ml蒸馏水中，加人除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒人已溶解的琼脂，混匀调pH为7.4，加人苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60℃左右，制成平板，不可高压灭菌。
制好的培养基应存放于2℃ ～10℃ ，不超过96h。 本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基使用时加2mL——3mL于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于培养垫上培养3.2.3.2 EC培养基同3.1.3.13.2.4仪器3.2.4.1隔水式恒温培养箱或恒温水浴3.2.4.2玻璃或塑料培养皿：60mm*15mm或50mm*12mm。3.2.4.3其他仪器同2.2.43.2.5检验步骤3.2.5.1准备工作同2.2.5.1。3.2.5.2过滤水样同2.2.5.2。3.2.5.3培养：水样滤完后，再抽气约5s，关仁滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在MFC培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放人44.5℃ 隔水式培养箱内培养24h士2h。如使用恒温水浴，则需用塑料平皿，将皿盖紧，或用防水胶带贴封每个平皿，将培养皿成叠封人塑料袋内，浸到44.5℃ 恒温水浴里，培养24h士2h耐热大肠菌群在此培养基上菌落为蓝色，非耐热大肠菌群菌落为灰色至奶油色。3.2.5.4对可疑菌落转种EC培养基，44.5℃ 培养24h士2h，如产气则证实为耐热大肠菌群
3.2.6结果报告 计数被证实的耐热大肠菌落数，水中耐热大肠菌群数系以100ml，水样中耐热大肠菌群菌落形成单位（CFU）表示，见式（2）。
耐热大肠菌菌落数（CFU/100ml）=所计得的耐热大肠菌菌落数*100/过滤的水样体积（mL )
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