2.3酶底物法2.3.1范围本标准规定了用酶底物法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的检测。本法可在24h判断水样中是否含有总大肠菌群及含有的总大肠菌群的最可能数（MPN）。本法可同时检测大肠埃希氏菌，见大肠埃希氏菌检测（4.3）。2.3.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.3.2.1  总大肠菌群酶底物法enzym : sub , trate technique for total coliforms  总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生价半乳糖昔酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法
2.3.3培养基与试荆2.3.3.1培养基 在本标准中酶底物法采用固定底物技术，本方法采用( MMO一MUG）培养基，可选用市售商品化制品。每1000mlMMO一MUG培养基所含基本成分为： A硫酸铵                                5.0g B硫酸锰                                0.5 rng C硫酸锌                                0.5 mg D硫酸镁                                100 mg E氯化钠                                10g F氯化钙                                50mg G亚硫酸钠                              40mg H两性霉素B                             1mg 1邻硝基苯件-β-D-毗喃半乳糖普（ONPG )     500mg J4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸普（MUG )    75mg K茄属植物萃取物（solanium萃取物）       500mg L N-2-乙基呱嗓NZ乙磺酸钠盐（HEPES钠盐） 5.3g M N-2-乙纂呱嗦NZ乙磺酸（HEPEs )            6.9g 2.3.3.2生理盐水    8.5g/l的生理盐水，用于稀释样品成分：
氯化钠    8.5g蒸馏水加至1000mL   溶解后．分装到稀释瓶内，每瓶90mL , 103.43kPa ( 121℃, 15lb) 20min高压灭菌
2.3.4仪器设备2.3.4.1量筒：100ml、500ml、l000ml。2.3.4.2吸管：lml、5ml及10ml的无菌玻璃吸管或塑料一次性吸管2.3.4.3稀释瓶：100ml、250ml、500mL及1O00ml能耐高压的灭菌玻璃瓶2.3.4.4试管：可高压灭菌的玻璃或塑料试管，大小约15mm*10cm。2.3.4.5培养箱：36℃ 士1℃ 。2.3.4.6高压蒸汽灭菌器。2.3.4.7于热灭菌器（烤箱）。2.3.4.8定量盘：定量培养用无菌塑料盘，含51个孔穴，每一孔穴可容纳2ml水样。
2.3.4.9程控定量封口机：用于51孔或97孔法（MPN法，最可能数法）定量盘的封口。
2.3.5检验步骤2.3.5.1水样稀释    检测所需水样为100mL若水样污染严重，可对水样进行稀释。取10mL水样加人到90ml灭菌生理盐水中，必要时可加大稀释度。2.3.5.2定性反应  用100ml的无菌稀释瓶量取100mL水样，加入2.7g士0.5gMMO—MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解后，放人36℃士1℃ 的培养箱内培养24h。2.3.5.3 10管法2.3.5.3.1用100ml的无菌稀释瓶量取100mL水样，加人2.79士0.5gMMO—MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解2.3.5.3.2准备10支15mm*10cm或适当大小的灭菌试管，用无菌吸管分别从前述稀释瓶中吸取10ml水样至各试管中，放人36℃ 士1℃ 的培养箱中培养24h。2.3.5.4  51孔定量盘法2.3.5.4.1用100ml的无菌稀释瓶量取100mL水样，加人2.7g士0.5gMMO一MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解。2.3.5.4.2将前述100 ml水样全部倒人51孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡，然后用程控定量封口机封口。放入36℃士1℃ 的培养箱中培养24h。
2.3.6结果报告2.3.6.1结果判读   将水样培养24h后进行结果判读，如果结果为可疑阳性，可延长培养时间到28h进行结果判读，超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果。2.3.6.2定性反应   水样经24h培养之后如果颜色变成黄色，判断为阳性反应，表示水中含有总大肠菌群。水样颜色未发生变化，判断为阴性反应定性反应结果以总大肠菌群检出或未检出报告2.3.6.3   10管法2.3.6.3.1将培养24h之后的试管取出观察，如果试管内水样变成黄色则表示该试管含有总大肠菌群。2.3.6.3.2计算有黄色反应的试管数，对照表4查出其代表的总大肠菌群最可能数（MPN）。结果以MPN/100 mL表示。如所有管未产生黄色，则可报告为总大肠菌群未检出。
2.3.6.4  51孔定量盘法2.3.6.4.1将培养24h之后的定量盘取出观察，如果孔穴内的水样变成黄色则表示该孔穴中含有总大肠菌群。
2.3.6.4.2计算有黄色反应的孔穴数，对照表5查出其代表的总大肠菌群最可能数（MPN）。结果以ml表示。如所有孔未产生黄色，则可报告为总大肠菌群未检出。   
   

 

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