2.2.3培养基与试剂2.2.3.1品红亚硫酸钠培养基2.2.3.1.1成分 A  蛋白膝                           10g B  酵母浸膏                         5g C  牛肉膏                           5g D  乳糖                             10g E  琼脂                             15g——20g F  磷酸氢二钾                       3.5g G  无水亚硫酸钠                      5g H  碱性品红乙醇溶液（50g/L)          20 mL I  蒸馏水                            1000 mL 2.2.3.1.2储备培养基的制备    先将琼脂加到500ml蒸馏水中，煮沸溶解，于另500ml一蒸馏水中加人磷酸氢二钾、蛋白陈、酵母浸膏和牛肉膏，加热溶解，倒人已溶解的琼脂，补足蒸馏水至1000mL，混匀后调pH为7.2一7.4，再加人乳糖，分装，68.95 kPa (115℃,10lb）高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。   本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2 mL一3 mL于灭菌吸收垫上．再将滤膜置于培养垫上培养2.2.3.1.3平皿培养基的配制   将上法制备的储备培养基加热融化，用灭菌吸管按比例吸取一定量的50g/l的碱陛品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一灭菌试管中，加灭菌水少许，使其溶解后，置沸水浴中煮沸10min以灭菌。   用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止，将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此种培养基15 ml倾人已灭菌的空平皿内待冷却凝固后置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过两周。如培养基已由淡粉色变成深红色，则不能再用2.2.3.2乳糖蛋白膝培养液同2.1.3.1。2.2.4仪器2.2.4.1滤器2.2.4.2滤膜，孔径0.45um
2.2.4.3抽滤设备
2.2.4.4无齿镊子。2.2.4.5其他仪器同多管发酵法2.1.42.2.5检验步骤2.2.5.1准备工作2.2.5.1.1滤膜灭菌：将滤膜放人烧杯中，加人蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次巧m谊。前两次煮沸后需更换水洗涤2次～3次，以除去残留溶剂。2.2.5.1.2滤器灭菌：用点燃的酒精棉球火焰灭菌。也可用蒸汽灭菌器l03.43kPa (121℃，151b）高压灭菌20min。
2.2.5.2过滤水样   用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100mL水样（如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释）注人滤器中，打开滤器阀门，在一5.07*10（4）Pa（负0.5大气压）下抽滤。2.2.5.3培养   水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分。移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃ 恒温箱内培养24h士2h。2.2.6结果观察与报告2.2.6.1挑取符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检：紫红色、具有金属光泽的菌落；深红色、不带或略带金属光泽的菌落；淡红色、中心色较深的菌落2.2.6.1.1凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白脉培养液，于37℃ 培养24h，有产酸产气者，则判定为急大肠菌群阳性2.2.6.1.2按式（1）计算滤膜上生长的总大肠菌群数，以每100ml水样中的总大肠菌群数（CFU／100ml)报告之
总大肠菌群菌落数（CFU／100ml)=数出的总大肠菌群数*100/过滤的水样体积（ml）   
   

 

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