中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验方法微生物指标
Standard examination methods for drinking water一Microbiolo只ical parameters
2、总大肠菌群
2.1多管发酵法2.1.1范围本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。2.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准2.1.2.1总大肠菌群total coljforms总大肠菌群指一群在37℃ 培养2h能发酵乳搪、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌2.1.3培养基与试荆2.1.3.1门乳糖蛋白膝培养液2.1.3.1.1成分 A 蛋白陈 10g B 牛肉膏 3g C 乳糖 5g D 氯化钠 5g E 嗅甲酚紫乙醇溶液（16g/L) 1mL F 蒸馏水 1000ml2.1.3.1.2制法将蛋白陈、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2——7.4，再加人1 ml 16g/l的澳甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，68.95kPa (115℃，10lb）高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用2.1.3.2二倍浓缩乳糖蛋白膝培养液按上述乳糖蛋白陈培养液〔2.1.3.1)，除蒸馏水外，其他成分量加倍。2.1.3.3伊红美蓝培养基2.1.3.3.1成分 A 蛋白陈 10g
B 乳糖 10g
C 磷酸氢二钾 2g D 琼脂 20g一30g E 蒸馏水 l000ml F 伊红水溶液（20g/l) 20ml
G 美蓝水溶液（5g/L) 13ml 2.1.3.3.2制法 将蛋白陈、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH为7.2，加人乳糖，混匀后分装，以68.95kPa (115℃ ，10lb）高压灭菌20min。临用时加热融化琼脂，冷至50℃ ～55℃ ，加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。2.1.3.4革兰氏染色液2.1.3.4.1结晶紫染色液A成分： a 结晶紫 1g b 乙醇（95%，体积分数） 20mL c 草酸钱水溶液（10g/l） 80mLB制法：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸馁溶液混合。注：结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成分，易出现假阳性结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。2.1.3.4.2革兰氏碘液A成分： a 碘 1g b 碘化钾 2g
c 蒸馏水 300 mlB制法：将碘和碘化钾先进行混合，加人蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。
2.1.3.4.3脱色剂乙醇（95%，体积分数）。2.1.3.4.4沙黄复染液A成分： a 沙黄 0.25g b 乙醇（95沉，体积分数） 10ml c 蒸馏水 90mLB制法：将沙黄溶解于乙醇中，待完全溶解后加人蒸馏水2.1.3.4.5染色法A将培养18h一24h的培养物涂片。B将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。C滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。D滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止，约30s，水洗E滴加复染剂，复染1min，水洗，待干，镜检。2.1.4仪器2.1.4.1培养箱：36℃ 士1℃ 。2.1.4.2冰箱：0℃ ～4℃ 。2.1.4.3天平2.1.4.4显微镜。2.1.4.5平皿：直径为9cm。2.1.4.6试管2.1.4.7分度吸管：1mL , 10mL。
2.1.4.8锥形瓶2.1.4.9小倒管。2.1.4.10载玻片2.1.5检验步骤2.1.5.1乳糖发酵试验2.1.5.1.1取10ml水样接种到10ml双料乳糖蛋白陈培养液中，取lml水样接种到10mL单料乳糖蛋白陈培养液中，另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中，混匀后吸取1ml（即0.1ml水样）注入到10ml单料乳糖蛋白陈培养液中，每一稀释度接种5管 对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接种5份10 mL水样双料培养基，每份接种10ml水样2.1.5.1.2检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1，0.1，0.0lmL甚至0.1 ,0.01 ,0.001 ml，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管。接种1mL以下水样时，必须作10倍递增稀释后，取1mL接种．每递增稀释一次，换用1支1 mL灭菌刻度吸管。2.1.5.1.3将接种管置36℃ 士l℃ 培养箱内，培养24h士2h，如所有乳糖蛋白膝培养管都不产气产酸，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按下列步骤进行。2.1.5.2分离培养 将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36℃ 土1℃ 培养箱内培养18h——24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验深紫黑色、具有金属光泽的菌落；紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色、中心较深的菌落2.1.5.3证实试验经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽抱杆菌，同时接种乳糖蛋白豚培养液，置36℃ 士1℃培养箱中培养24h士2h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在2.1.6结果报告 根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN ( most Probable number，最可能数）检索表，报告每l00ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）值。乌管法结果见表2.15管法结果见表3稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均阴性时，可报告总大肠菌群未检出。
表2 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN )
5个10ml管中阳性管数 最可能数（MPN）
0 < 2.2
1 2.2
2 5.1
3 9.2
4 16.0
5 >16
2.2滤膜法2.2.1范围本标准规定了用滤膜法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定2.2.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.2.2.1总大肠菌群滤膜法membrane rilter technique ror total coliforms总大肠菌群滤膜法是指用孔径为0.45um的微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在添加乳糖的选择隆培养基上37℃培养24h，能形成特征性菌落的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检测水中总大肠菌群的方法。
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